[發明專利]一種川貝母種子超低溫保存方法

在審

• 申請號: 201711305652.6
• 申請日: 2017-12-10
• 公開（公告）號: CN107836447A
• 公開（公告）日: 2018-03-27
• 發明（設計）人: 羅嬋
• 申請（專利權）人: 長沙愛揚醫藥科技有限公司
• 主分類號: A01N3/00
• 分類號: A01N3/00;A01C1/00
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及一種川貝母種子的超低溫保存方法，屬于種質資源保存的技術領域。

背景技術

川貝母又稱川貝母母、暗紫貝母、甘肅貝母、梭砂貝母的干燥鱗莖。多年生草本，高15～25cm。鱗莖球形或圓錐形。莖直立,無毛，綠色或暗紫色。葉除最下部為對生外,均為互生或近于對生，無柄；葉片線形或線狀披針形,長3.6～6.5cm,寬3～7mm,先端急尖。花單生于莖頂；深紫色，略有黃褐色小方格,有葉狀苞片1,花被片6,長2.5～2.7cm,外輪3片近長圓形，寬6～9mm,內輪3片倒卵狀長圓形，寬10～13mm,蜜腺窩不很明顯；雄蕊6,花藥近基著，花絲有時密被小乳突；柱頭3裂,裂片外展，長0.5～1(～1.5)mm。蒴果長圓形,具6棱，棱上有寬約1mm的窄翅。花期6月,果期8月。生于海拔3200～4500m的草地上。質硬脆，斷面白色，富粉性。氣微，味微苦。

種質資源研究的首要任務是收集種質，安全保存種質。目前種質資源保存方式為常溫、低溫保存川貝母種子兩種方式。常溫保存中藥材種子，每保存5年就需要重新繁種更新，因為植物種子經過5年的保存，活力降低很快，只有50％左右；低溫保存中藥材種子，在中國，建立了國家中期庫和國家種質庫，國家中期庫保存的溫度為4℃左右，相對濕度小于65％，一般設計貯藏種子的壽命為5～10年，國家種質庫為種質長期保存庫，庫中的溫度為‐18℃左右，相對濕度小于50％，設計貯藏壽命達20年以上，也就是說種質在長期庫中保存，活力同樣隨著時間的推移降低，種質20年后一般需要更新繁種，不是永久的保存。

因此，為了安全保存川貝母種質資源，研究探索一種安全而長久保存川貝母種質資源的方法很有意義，它能夠減少或者避免種子更新繁種，省時省力，阻斷繁種更新的過程中種質間基因漂移等產生種質變異，保證種質的遺傳穩定性。

發明內容

本發明的目的是提供一種適合于川貝母種子的超低溫保存法，該方法能夠補充現在川貝母種質資源保存技術的不足，可以長期安全的保存川貝母種質資源，為川貝母種質資源保存提供一條新的有效的技術途徑。

本發明的目的是提供一種川貝母種子超低溫保存方法，包括步驟以下：

(1)室溫下將川貝母種子用A試劑處理，處理20～50min后，取出處理過的川貝母種子；

(2)處理過的川貝母種子放入裝有B試劑的凍存管中，室溫溫育15～35min，再將其放入梯度降溫盒中；

(3)將帶有川貝母種子的梯度降溫盒放入低溫冰箱中，使其降溫盒的溫度在‐35℃～‐60℃，降溫速度為‐1℃/min，然后取出降溫盒，馬上將此降溫盒放入液氮中，進行液氮低溫保存備用。

在一個具體方案中，步驟(1)中所述A試劑是指B5液體培養液，還包含有1.5～2.5mol/L甘油和1～1.5mol/L二甲基亞砜。

所述A試劑優選110～121℃高壓蒸汽滅菌15min以上，冷卻至室溫放置。

在一個具體方案中，步驟(2)中所述梯度降溫盒中含有100％甘油或異丙醇，可以重復使用。

在一個具體方案中，步驟(2)中所述B試劑是指B5液體培養液，還包含有2.6～3.6mol/L甘油、1.6～2mol/L二甲基亞砜和0.45～0.75mol/L蔗糖。

所述B試劑優選110～121℃高壓蒸汽滅菌15min以上，冷卻至室溫放置。

在一個具體方案中，步驟(3)中所述低溫冰箱的溫度要求一般在‐70℃以下。

川貝母上述所保存的川貝母種子進行解凍時，若室溫超過20℃，將凍存管從液氮中取出，直接利用室溫自然解凍；若室溫低于20℃，將凍存管從液氮中取出，并置于20～24℃水浴箱中解凍。解凍完后，取出凍存管中川貝母種子，再用自來水或者蒸餾水洗滌3～5次，清洗后川貝母種子直接用于培養。

技術效果

1、本發明進行川貝母超低溫保存，工藝簡單，穩定性可靠，保存后的川貝母種子的發芽率和鮮種的發芽率無顯著性差異，發芽試驗結果表明超低溫保存后川貝母種子發芽率高達90％以上。

2、本發明具有長期、有效、安全保存川貝母種子，是川貝母種質資源長期保存的最有效方法。

具體實施方式

下面，本發明將用實施例進行進一步的說明，但是它并不限于這些實施例的任何一個或類似實例。

實施例1