[發明專利]一種川貝母種子超低溫保存方法在審
| 申請號： | 201711305652.6 | 申請日： | 2017-12-10 |
| 公開（公告）號： | CN107836447A | 公開（公告）日： | 2018-03-27 |
| 發明（設計）人： | 羅嬋 | 申請（專利權）人： | 長沙愛揚醫藥科技有限公司 |
| 主分類號： | A01N3/00 | 分類號： | A01N3/00;A01C1/00 |
| 代理公司： | 暫無信息 | 代理人： | 暫無信息 |
| 地址： | 410205 湖南省長沙市長沙高新開*** | 國省代碼： | 湖南;43 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 川貝母 種子 超低溫 保存 方法 | ||
1.一種川貝母種子超低溫保存方法，包括步驟以下：
(1)室溫下將川貝母種子用A試劑處理，處理20～50min后，取出處理過的川貝母種子；
(2)處理過的川貝母種子放入裝有B試劑的凍存管中，室溫溫育15～35min，再將其放入梯度降溫盒中；
(3)將帶有川貝母種子的梯度降溫盒放入低溫冰箱中，使其降溫盒的溫度在‐35℃～‐60℃，降溫速度為‐1℃/min，然后取出降溫盒，馬上將此降溫盒放入液氮中，進行液氮低溫保存備用。
2.根據權利要求1的方法，其中步驟(1)所述A試劑是指B5液體培養液，還包含有1.5～2.5mol/L甘油和1～1.5mol/L二甲基亞砜。
3.根據權利要求1的方法，其中所述A試劑優選110～121℃高壓蒸汽滅菌15min以上，冷卻至室溫放置。
4.根據權利要求1的方法，其中步驟(2)所述梯度降溫盒中含有100％甘油或異丙醇，可以重復使用。
5.根據權利要求1的方法，其中步驟(2)所述B試劑是指B5液體培養液，還包含有2.6～3.6mol/L甘油、1.6～2mol/L二甲基亞砜和0.45～0.75mol/L蔗糖。
6.根據權利要求1的方法，其中所述B試劑優選110～121℃高壓蒸汽滅菌15min以上，冷卻至室溫放置。
7.根據權利要求1的方法，其中步驟(3)所述低溫冰箱的溫度要求一般在‐70℃以下。
8.根據權利要求1的方法，其中所保存的川貝母種子進行解凍時，若室溫超過20℃，將凍存管從液氮中取出，直接利用室溫自然解凍；若室溫低于20℃，將凍存管從液氮中取出，并置于20～24℃水浴箱中解凍，解凍完后，取出凍存管中川貝母種子，再用自來水或者蒸餾水洗滌3～5次，清洗后川貝母種子直接用于培養。
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