[發明專利]一種絨促性素精品的制備方法

在審

• 申請號: 201711301020.2
• 申請日: 2017-12-10
• 公開（公告）號: CN109897097A
• 公開（公告）日: 2019-06-18
• 發明（設計）人: 劉乃山;夏襯來;張娟
• 申請（專利權）人: 青島康原藥業有限公司
• 主分類號: C07K14/59
• 分類號: C07K14/59;C07K1/14;C07K1/30
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• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種絨促性素精品的制備方法。本發明的技術方法是將柱分離干燥品經溶解、過濾、沉淀、離心脫水、干燥得到絨促性素精品。該技術的優點在于用純化水、冷乙醇、乙酸銨、磷酸鈉、乙酸鈣溶液作為提取液，用冷乙醇進行沉淀，能夠有效的去除雜質，并保證蛋白活性。本方法提取的絨促性素精品產率高、效價高；且本方法工藝簡單、生產成本低，產量高，可工業化生產。

技術領域

本發明涉及生物技術領域，具體地說涉及一種絨促性素精品的制備方法。

背景技術

絨毛膜促性腺激素它是從受精卵著床第一天，即受孕的第8天開始，由胎盤滋養層合體細胞分泌的。受孕后第20天尿中可測得HCG，當妊娠45天時，尿中HCG的濃度升高，60-70天時達到高峰。HCG是一種糖蛋白，由α-鏈和β-鏈兩個亞基組成。其核心部分由氨基酸組成。

臨床主要用于男性垂體機能不足所致的性機能過低癥和隱睪癥，用于由黃體功能不全引起的功能性子宮出血病和習慣性流產。與自孕馬血清、絕經期婦女尿中提取的促性激素合用，可誘發排卵，治療不育癥，亦可用于皮膚搔癢癥、神經性皮炎等。

發明內容

本發明的目的是提供了一種絨促性素精品的提取方法。

本發明的技術方案是：將柱分離干燥品經溶解、過濾沉淀、離心脫水、干燥后得絨促性素精品，包括以下步驟：

（1）溶解：將絨促性素柱分離干燥品按重量的1:25的比例加入純化水溶解，攪拌溶解至清，在攪拌下加入等體積的冷乙醇使乙醇溶液的濃度達到47%,加入總體積8%的乙酸銨，溶液澄清，再緩慢加入0.2mol/l的磷酸鈉溶液，其用量為投料量的6倍，攪拌15分鐘后，再加入0.3mol/l的乙酸鈣溶液，其用量為投料量的6倍。最后用5.0mol/lNaOH調節PH8.0-8.5，穩定后繼續攪拌1-1.5小時，結束后，置六罐離心機離心30分鐘，棄去沉淀物的離心液。

（2）過濾沉淀：將離心液用20nm的濾芯過濾后，邊攪拌邊加入溫度不高于-10℃的95%的冷乙醇，直至乙醇度數為79-81，停止加乙醇，然后置冰柜靜置20小時以上，沉淀過程最終溫度不超過10℃。

（3）離心脫水：沉淀后，虹吸上層乙醇，下層沉淀物用冷凍離心機離心（離心機的轉速不低于3500rpm,溫度不高于4℃，離心時間為30min），離心后收集離心固體物，然后按固體物重量1:0.8加入無水乙醇脫水兩次，收集固體物。

（4）干燥工序：將離心固體物置真空干燥箱中干燥，用五氧化二磷作吸水劑，干燥12小時后的產品即為絨促性素精品。

與現有技術相比，本發明的優點和積極效果是：

傳統工藝制得的絨促性素精品，工藝較復雜，成本較高，效價達不到10000iu/mg，而采用本方法制備的絨促性素精品，工藝簡單，成本低，制得的絨促性素精品效價達10000iu/mg以上。

具體實施方式

下面結合具體實施例對本發明作進一步說明。

實施例

所述的絨促性素柱分離干燥品經溶解、過濾、沉淀、干燥后得到絨促性素精品，包括如下步驟：

1.溶解：柱分離干燥品用25倍量（w/v）純化水攪拌溶解至清。在攪拌下加入等體積-5℃以下冷乙醇，使乙醇溶液的濃度達47%，此時溶液混濁，加入總體積8%（v/ w）的乙酸銨，溶液澄清 ，再緩慢加入0.2mol/L磷酸鈉溶液，其用量為投料量的8倍(w/v)，再加入0.3mol/L 乙酸鈣溶液，其用量為投料量的6倍(w/v)。用5.0 mol/LNaOH調節pH8.0-8.5，穩定后繼續攪拌1-1.5小時，結束后，置離心機離心30分鐘，棄去沉淀物，得離心液。

2.過濾：用20nm的濾芯過濾離心液。