[發明專利]一種定量檢測豬瘟病毒抗體的磁微粒熒光免疫試劑盒

在審

• 申請號: 201711297715.8
• 申請日: 2017-12-08
• 公開（公告）號: CN108152509A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 李根平
• 申請（專利權）人: 廣州源起健康科技有限公司
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/543;G01N33/531
• 代理公司: 廣州市深研專利事務所 44229
• 代理人: 姜若天

本發明公開了一種定量檢測豬瘟病毒抗體的磁微粒熒光免疫試劑盒，由豬瘟E2抗原免疫磁珠、熒光物質標記羊抗豬抗體、洗滌液、增強液、陰性對照血清和陽性對照血清組成。本發明所述的定量檢測豬瘟病毒抗體磁微粒熒光免疫試劑盒與RT?PCR方法、ELISA方法相比，具有操作簡便、適合不同數量樣本檢測且檢測速度快(20min左右即可有結果)；與膠體金免疫層析試紙條相比，本發明具有靈敏度更高、線性范圍更寬，且可實現精確定量等優點。本試劑盒的檢測結果能夠準確反映接種疫苗過程中機體抗CSFV血清IgG抗體變化規律，為養豬戶CSF防控提供科學合理的技術支持。

技術領域

本發明屬于動物疫病檢測領域，具體的說是一種定量檢測豬瘟病毒抗體的磁微粒熒光免疫試劑盒。適用于檢測豬血清或血漿中豬瘟病毒抗體的水平。

背景技術

豬瘟(Classical swine fever，CSF)是由豬瘟病毒(Classical swine fevervirus，CSFV)引起豬的一種急性、發熱性、接觸性傳染病，該病被我國定為一類動物疫病，被世界動物衛生組織列為A類傳染病。該病傳播速度快、流行廣、發病率高和致死率高，對我國的養豬業產生的危害極大。目前我國豬瘟的防治措施以豬瘟兔化弱毒疫苗免疫為主，對疫苗免疫效果的評價主要通過豬瘟病毒抗體水平的檢測實現。因此國內市場急需性能穩定、準確的CSFV血清抗體診斷試劑盒，監測群體免疫抗體水平和抗體消長規律。

目前檢測豬瘟病毒抗體的方法主要有：

(1)正向間接血凝實驗被農業部推薦為豬瘟疫苗抗體檢測的主要方法，但其靈敏度低，檢測血清需滅活處理，增加了檢測時間和難度，肉眼判讀誤差大，不適合基層獸醫部門廣泛使用。

(2)競爭ELISA法：雖然特異性強、準確度高，但操作過程繁瑣、需要配備專業的技術人員。

(3)膠體金/熒光免疫層析法：雖然操作簡單，檢測時間短，但往往準確度不高，不能準確定量，檢測范圍窄。

(4)化學發光法：雖然靈敏度高、檢測范圍寬等優點，但需要專業的儀器設備和技術人員，不能實現樣本的現場檢測。

(5)RT-PCR：有檢出率高、特異性高的優點，但是需要昂貴的儀器設備，檢測時間較長(4～6h)，操作不當容易出現假陽性和假陰性的結果。

因此，開發出一種靈敏度高、操作簡便、快速的診斷試劑尤為重要。

發明內容

本發明的目的是為解決上述技術問題的不足，提供一種靈敏度高、操作簡便、檢測時間短、準確定量檢測豬瘟病毒抗體的磁微粒熒光免疫試劑盒。

為實現上述目的，本發明采用了如下技術方案：

一種定量檢測豬瘟病毒抗體的磁微粒熒光免疫試劑盒，由豬瘟E2抗原免疫磁珠、熒光物質標記羊抗豬抗體、洗滌液、增強液、陰性對照血清和陽性對照血清組成。

在上述的磁微粒熒光免疫試劑盒中，所述免疫磁珠為帶有官能團修飾的直徑1～3μm的超順磁珠與蛋白的共價偶聯物，其中所使用的磁珠為羧基磁珠、氨基磁珠、羥基磁珠、甲苯磺酰基磁珠、NHS磁珠、鏈酶親和素磁珠、蛋白A磁珠、蛋白G磁珠、抗小鼠IgG磁珠、親水磁珠、疏水磁珠中的一種或幾種；所述的E2抗原為PK-15豬腎細胞表達的。

在上述的磁微粒熒光免疫試劑盒中，所述的熒光物質為鑭系鰲和物，為銪(Eu3+)、釤(Sm3+)、鋱(Tb3+)、鏑(Dy3+)等稀土元素組成的螯合物或其組合。激發波長為290～350nm，發射波長為500～650nm。