[發(fā)明專利]一種胃蛋白酶制備苦味肽的方法及苦味肽的應(yīng)用

有效

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• 申請日: 2017-12-08
• 公開（公告）號: CN107779490B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發(fā)明（設(shè)計）人: 吳迪;羅成;鄧尚貴
• 申請（專利權(quán)）人: 浙江海洋大學(xué)
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;A23L33/18
• 代理公司: 浙江千克知識產(chǎn)權(quán)代理有限公司 33246
• 代理人: 賈森君

本發(fā)明公開了一種胃蛋白酶制備苦味肽的方法，包括：制備上清液；酶水解制備苦味肽粗液；飽和透明質(zhì)酸配制；通過非牛頓流體分離制備苦味肽粗濃縮液。該方法分離或者去除苦味肽的效果好，簡單易操作；所分離出的苦味肽可用于哮踹，心血管疾病的預(yù)防。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明屬于水產(chǎn)品深加工領(lǐng)域，具體涉及一種胃蛋白酶制備苦味肽的方法及應(yīng)用。

背景技術(shù)

由于苦味一般與毒性和藥性相關(guān)，其不適的口感使人避之，但苦味也是人類長期進(jìn)化適應(yīng)生存的方式最重要的元素之一。食品苦味主要來源于蛋白水解肽所暴露的疏水性氨基酸基團(tuán)。雖然苦味在食品中不易被接受，但在醫(yī)學(xué)上卻有廣泛的應(yīng)用，如許多苦味肽具有血管緊張素酶抑制作用。此外，苦味受體既存在于舌蕾細(xì)胞中，而且也存在于肺氣管及肺支氣管上皮細(xì)胞中，近年發(fā)現(xiàn)食源性苦味分子可成為肺氣管和支氣管上皮細(xì)胞苦味受體激動劑，從而可能用于抗哮喘藥物的制備。魚蛋白經(jīng)酶水解后其溶解性、熱穩(wěn)定性以及營養(yǎng)特性都會得到極大地改善，然而由于疏水性氨基酸的暴露及空間結(jié)構(gòu)的改變形成苦味肽，所以無論食品或者功能食品，或者藥品的生產(chǎn)時常常需要分離苦味肽，或者去除苦味肽。雖然目前分離或者脫苦味方法很多，但通常帶入很多副作用，比如最早使用的在酶解液中加入活性炭來進(jìn)行選擇性分離，會帶入活性炭的特殊氣味。而非常規(guī)方法則需要昂貴的儀器和繁瑣的程序，從而限制食品或者功能食品的商業(yè)化程度。

透明質(zhì)酸是一種食品添加劑，近年發(fā)現(xiàn)透明質(zhì)酸具有許多新的生物學(xué)功能。比如，透明質(zhì)酸被發(fā)現(xiàn)是動物細(xì)胞的CD44跨膜受體之配體，透明質(zhì)酸調(diào)節(jié)許多正常細(xì)胞的活動，但也參與癌細(xì)胞的浸潤和轉(zhuǎn)移，與此同時由于癌細(xì)胞高表達(dá)透明質(zhì)酸酶，故被用來藥物的定向和緩釋投遞。透明質(zhì)酸是一種從細(xì)菌到哺乳細(xì)胞內(nèi)廣泛存在的大分子多糖類物質(zhì)，其分子量變化從幾千至高達(dá)上百萬，但對人體仍無抗原原性。透明質(zhì)酸的生理功能和應(yīng)用特性與其分子量、分子量分布等分子參數(shù)密切相關(guān)。此外，高鎖水性使透明質(zhì)酸顯示非牛頓流體和粘彈性行為，其體內(nèi)、體外流變學(xué)也正在受到廣泛研究，許多新的應(yīng)用正在開發(fā)，現(xiàn)已廣泛用于藥物緩釋投遞，用于癌細(xì)胞相當(dāng)高表達(dá)的透明質(zhì)酸酶的降解作用。近年，通過透明質(zhì)酸的發(fā)酵制備，已廣泛用于食品與化妝品等領(lǐng)域。透明質(zhì)酸的早期制備是從雞冠，或者動物一些器官制備，現(xiàn)在由于可以發(fā)酵生產(chǎn)，所以透明質(zhì)酸得以進(jìn)入食品領(lǐng)域。雖然人們對其物性還不是很清楚，但透明質(zhì)酸的許多神奇效果、功能正在食品研究與制造中被發(fā)掘。現(xiàn)在透明質(zhì)酸的非牛頓流體特性也被廣泛用于骨關(guān)節(jié)炎及癌細(xì)胞的定向藥物投遞的研究，然而體外透明質(zhì)酸的非牛頓流體物理特性以及與蛋白/肽的物理化學(xué)作用機(jī)理的了解仍然不清楚。除透明質(zhì)酸分子量外，其溫度，濃度和某些媒介分子等都影響其粘度和流變學(xué)性質(zhì)，進(jìn)而影響苦味肽的富集或者消除。

因此，有必要研究一種更有利的篩選苦味肽的方法。

發(fā)明內(nèi)容

本發(fā)明目的是提供一種胃蛋白酶制備苦味肽的方法，解決上述問題。

本發(fā)明的技術(shù)方案是：

一種胃蛋白酶制備苦味肽的方法，該方法包括如下步驟：

(1)制備上清液：清洗大黃魚，然后去鱗，再用去離子水清洗后，將所述大黃魚切成魚塊，將所述魚塊與緩沖液放入高速組織搗碎機(jī)中打漿并離心，取上清液加熱至內(nèi)源性酶失活，備用；

(2)酶水解制備苦味肽粗液：在所述上清液中加入質(zhì)量濃度為10g/L的胃蛋白酶，混合攪拌均勻，置于水浴鍋中，將pH調(diào)至3.5，然后酶解、冷卻，調(diào)回pH至7.0，定容，離心，上清液即為苦味肽粗液，取所述苦味肽粗液備用。

(3)飽和透明質(zhì)酸配制：將透明質(zhì)酸鈉鹽加入至裝有無菌水的器皿中，充分?jǐn)嚢柚列纬赏该髡承砸后w,在器皿口覆蓋保鮮膜。

(4)通過非牛頓流體分離制備苦味肽粗濃縮液：在容器中加入所述苦味肽粗液，再加入與所述苦味肽粗液等體積的透明粘性液體，此時溶液的上層為所述透明粘性液體，下層為所述苦味肽粗液，將所述溶液經(jīng)過離心或者靜置的離心管收集組分，然后通過感官評定確定苦味肽的組分位置，收集苦味肽組分，獲得苦味肽粗濃縮液。