[發(fā)明專利]一種胃蛋白酶制備苦味肽的方法及苦味肽的應用

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711295246.6
• 申請日: 2017-12-08
• 公開（公告）號: CN107779490B
• 公開（公告）日: 2020-07-03
• 發(fā)明（設計）人: 吳迪;羅成;鄧尚貴
• 申請（專利權）人: 浙江海洋大學
• 主分類號: C12P21/06
• 分類號: C12P21/06;A23L33/18
• 代理公司: 浙江千克知識產權代理有限公司 33246
• 代理人: 賈森君

1.一種胃蛋白酶制備苦味肽的方法，其特征在于，該方法包括如下步驟：

(1)制備上清液：清洗大黃魚，然后去鱗，再用去離子水清洗后，將所述大黃魚切成魚塊，將所述魚塊與緩沖液放入高速組織搗碎機中打漿并離心，取上清液加熱至內源性酶失活，備用；

(2)酶水解制備苦味肽粗液：在所述上清液中加入質量濃度為10g/L的胃蛋白酶，混合攪拌均勻，置于水浴鍋中，將pH調至3.5，然后酶解、冷卻，調回pH至7.0，定容，離心，上清液即為苦味肽粗液，取所述苦味肽粗液備用；

(3)飽和透明質酸配制：將透明質酸鈉鹽加入至裝有無菌水的器皿中，充分攪拌至形成透明粘性液體，在器皿口覆蓋保鮮膜，其中，所述透明粘性液體含有質量濃度為20g/L的透明質酸；

(4)通過非牛頓流體分離制備苦味肽粗濃縮液：在容器中加入所述苦味肽粗液，再加入與所述苦味肽粗液等體積的步驟(3)中的透明粘性液體，此時溶液的上層為所述透明粘性液體，下層為所述苦味肽粗液，將所述溶液經(jīng)過離心或者靜置的離心管收集組分，然后通過感官評定確定苦味肽的組分位置，收集苦味肽組分，獲得苦味肽粗濃縮液。

2.根據(jù)權利要求1所述的胃蛋白酶制備苦味肽的方法，其特征在于：步驟(1)中所述魚塊為100g。

3.根據(jù)權利要求1所述的胃蛋白酶制備苦味肽的方法，其特征在于：步驟(1)中所述魚塊與緩沖液的質量比為1：5，所述緩沖液為0.1×PBS。

4.根據(jù)權利要求1所述的胃蛋白酶制備苦味肽的方法，其特征在于：步驟(1)中所述打漿的時間為5-10min，所述離心的轉速為6000r/min，時間為5min，所述上清液加熱的時間為5min，溫度為90℃。

5.根據(jù)權利要求1所述的胃蛋白酶制備苦味肽的方法，其特征在于：步驟(2)中所述水浴鍋中水浴的溫度為50-60℃，酶解時間為4h，酶解后升溫至95℃滅酶15min，所述離心的轉速為12000r/min，時間為10min。

6.根據(jù)權利要求1所述的胃蛋白酶制備苦味肽的方法，其特征在于：步驟(2)中所述pH通過1M的HCl調節(jié)。

7.根據(jù)權利要求1所述的胃蛋白酶制備苦味肽的方法，其特征在于：步驟(2)完成后，還進行苦味肽粗液感官評定，所述感官評定與步驟（4）中的感官評定的方式相同：由6-9名感官評定人，參加苦味肽的標準曲線建立，即單盲法依次判斷出高、中、低苦味濃度，然后依次測試5-100mg咖啡因的感官苦味強度，以形成自身的苦味標準曲線。

8.根據(jù)權利要求1所述的胃蛋白酶制備苦味肽的方法，其特征在于：步驟(4)中所述離心的轉速為15000r/min，溫度為4℃，時間為30min。