[發明專利]一種同時表達靶向CD19和CD20的CAR與PD1-CD28嵌合受體的慢病毒載體

在審

• 申請號: 201711288511.8
• 申請日: 2017-12-07
• 公開（公告）號: CN108085340A
• 公開（公告）日: 2018-05-29
• 發明（設計）人: 陸哲明;張超亭
• 申請（專利權）人: 北京市腫瘤防治研究所
• 主分類號: C12N15/867
• 分類號: C12N15/867;C12N15/66;C12N15/62;C12N5/10;A61K35/17;A61P35/00
• 代理公司: 北京路浩知識產權代理有限公司 11002
• 代理人: 王文君;王璐

本發明涉及分子生物學領域，具公開了一種同時表達靶向CD19和CD20的CAR與PD1?CD28嵌合受體的慢病毒載體。所述慢病毒載體通過同時高效表達靶向CD19和CD20的CAR和PD1?CD28嵌合體，使該載體感染的T細胞不僅可以靶向識別表達CD19和CD20的腫瘤細胞，而且可以解除PD?L1/PD1介導的免疫抑制，從而發揮更強地殺傷腫瘤細胞的能力。進一步地，本發明優化了載體中關鍵元件的選擇和連接順序，提高靶向CD19和CD20的CAR和PD1?CD28嵌合體在人類T細胞中的表達效率。

技術領域

本發明涉及分子生物學領域，具體地說，涉及一種同時表達靶向CD19和CD20的CAR與PD1-CD28嵌合受體的慢病毒載體。

背景技術

近年來，抗CD19的CAR-T在治療復發，耐藥，難治B細胞白血病和淋巴瘤方面取得了舉世矚目的成就，引起世界各國腫瘤臨床醫生的極大興趣。但是僅靶向CD19的CAR-T治療B細胞來源腫瘤會導致腫瘤細胞CD19低表達或不表達，從而導致腫瘤細胞免疫逃逸而產生復發和耐藥。因此同時靶向CD19和CD20的CAR可以同時靶向B細胞來源腫瘤的CD19和CD20兩個靶點，因此對于B細胞來源腫瘤尤其是CD19CAR-T治療失敗的患者，雙靶點CAR-T會取得較好的治療效果。CD19和CD20是B細胞系的細胞，包括正常的B細胞，前B細胞，B細胞淋巴瘤和白血病細胞，特異性表達的兩個膜蛋白,其他細胞和組織都不表達CD19和CD20。研究表明，阻斷PD-L1/PD1介導的免疫抑制將會是CAR-T成功用于治療惡性腫瘤的關鍵。

阻斷PD-L1和PD1的結合，理論上就可以消除PD1信號對T細胞的抑制，激活T細胞的免疫反應，起到抗腫瘤的效果。目前，FDA批準了兩個抗PD1的單抗Nivolumab和Pembrolizumab用于治療其他療法已失敗的轉移性非小細胞肺癌和黑色素瘤。雖然我國黑色素瘤的發病率并不高，但肺癌是我國第一大癌，同時也是死亡率最高的癌癥。其中的非小細胞肺癌，生存率極低。5年生存率不容樂觀。目前，國家食品藥品監督總局(CFDA)尚未批準Nivolumab和Pembrolizumab在國內臨床使用。而且Nivolumab和Pembrolizumab需要多次使用，對大多數患者來說，醫療負擔過重。

針對PD-L1的單抗也能起到類似的抗腫瘤效果。根據目前已經報道的臨床研究，MPDL3280A(anti-PD-L1人源單抗)在治療黑色素瘤，非小細胞肺癌，直結腸癌(colorectalcancer)和膀胱癌(bladder cancer)都取得了不同程度的療效。MEDI4736是另外一個人源抗PD-L1單克隆抗體，它能阻斷PD-L1和PD1的結合，使得T細胞能夠識別和殺死腫瘤細胞。對于MEDI4736的臨床抗腫瘤效果正在多個中心展開，其中也包括非小細胞性肺癌和頭頸部腫瘤。

鑒于抗PD-L1/PD1抗體免疫治療在我國的應用問題，急需提供一種可替代的治療產品及方法。

發明內容

為了解決現有技術中存在的問題，本發明的目的是提供一種同時表達靶向CD19和CD20的CAR與PD1-CD28嵌合受體的慢病毒載體及其構建方法與應用。

為了實現本發明目的，本發明的技術方案如下：

第一方面，本發明提供一種同時表達靶向CD19和CD20的CAR與PD1-CD28嵌合受體的慢病毒載體。