[發明專利]一種PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201711287462.6
• 申請日: 2017-12-07
• 公開（公告）號: CN108152484A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 劉天赫;曹文強;趙柏松
• 申請（專利權）人: 珠?；羝战鹚贯t藥研究院股份有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 張曉俊

本發明屬于檢驗技術領域，尤其涉及一種PD?L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒。本發明的PD?L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒，包括：標準品、鼠抗人PD?L1抗體I包被的免疫磁珠、酶標記的鼠抗人PD?L1抗體II、化學發光底物與輔助試劑。本發明的PD?L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒具有特異性強，穩定性好，靈敏度高，成本較低，適用于大規模臨床推廣。

技術領域

本發明屬于檢驗技術領域，尤其涉及一種PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒。

背景技術

程序性死亡分子1(PD-1)主要在激活的T淋巴細胞、B淋巴細胞中表達。程序性死亡分子1配體-1(PD-L1)，又稱B7同源分子(B7-H1)是PD-1的配體。PD-L1與PD-1結合，能夠抑制淋巴細胞的增殖和活化。但是，腫瘤微環境會誘導浸潤的T細胞高表達PD-1分子，腫瘤細胞會高表達PD-1的配體PD-L1和PD-L2，導致腫瘤微環境中PD-1通路持續激活，T細胞功能被抑制，無法殺傷腫瘤細胞，從而導致腫瘤免疫逃逸。PD-1的抗體可以阻斷這一通路，部分恢復T細胞的功能。研究表明腫瘤細胞通過形成PD-1/PD-L1通路的方式抑制免疫細胞，進而躲避人體免疫系統的攻擊。因此，PD-1和PD-L1在人體內的含量直接決定PD-L1類單抗藥物的使用效果。

基于上述原理，通過檢測人體內PD-L1的含量，可以預知PD-L1單抗的使用效果，如果病人體內PD-L1的含量過低，則PD-L1單抗的治療效果可能會降低，反之，PD-L1單抗可能會表現出較好的療效。同時精確的定量可以指導醫生在治療過程中劑量的選擇，達到最佳的治療效果。通過檢測人體內PD-L1抗體的含量，可以研究PD-L1單抗在病人體內的分布、吸收、代謝情況，進而為臨床醫生提供PD-L1單抗的用藥指導。目前免疫磁珠在化學發光免疫分析、核酸提取等領域已有廣泛的應用，但PD-L1的磁珠酶聯免疫檢測尚無文獻報道。

發明內容

本發明提供了一種PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒，可解決現有技術中存在的問題。

根據本發明的一個方面，本發明提供的PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒，包括：標準品、鼠抗人PD-L1抗體I包被的免疫磁珠、酶標記的鼠抗人PD-L1抗體II、化學發光底物與輔助試劑。

進一步地，所述標準品的制備方法為：用PBS緩沖液將PD-L1抗體標準品稀釋，分別制備成100ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.125ng/mL、0ng/mL的梯度標準溶液。

進一步地，所述鼠抗人PD-L1抗體I包被的免疫磁珠的制備方法：將活化磁珠與鼠抗人PD-L1抗體I孵育0.5-2h，加入BSA，采用MES清洗得到免疫磁珠。

進一步地，所述活化磁珠的制備方法：將磁珠經MES緩沖液進行清洗，之后加入1-2％戊二醛/PBS震蕩反應0.5-2h，之后MES緩沖液進行清洗，得到活化磁珠。

進一步地，所述磁珠的制備方法：二價鐵鹽與三價鐵鹽反應得到鐵鹽，所述鐵鹽與堿液反應得到磁珠。

進一步地，所述酶標記的鼠抗人PD-L1抗體II制備：將鼠抗人PD-L1抗體II溶于NaCl，并與醛化辣根過氧化酶溶液混合；加入NaHCO₃緩沖液混合20-30h；加入賴氨酸，放置1-3h，得到酶標記的鼠抗人PD-L1抗體II。

進一步地，所述醛化辣根過氧化酶溶液制備方法：取8-12mg辣根過氧化酶溶于1-2％戊二醛/PBS，室溫反應15-20h，之后采用PBS在2-5℃透析12h得到醛化辣根過氧化酶。