[發明專利]一種PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒

在審

• 申請號: 201711287462.6
• 申請日: 2017-12-07
• 公開（公告）號: CN108152484A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 劉天赫;曹文強;趙柏松
• 申請（專利權）人: 珠海霍普金斯醫藥研究院股份有限公司
• 主分類號: G01N33/53
• 分類號: G01N33/53;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 北京力量專利代理事務所(特殊普通合伙) 11504
• 代理人: 張曉俊

1.一種PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒，其特征在于，包括：標準品、鼠抗人PD-L1抗體I包被的免疫磁珠、酶標記的鼠抗人PD-L1抗體II、化學發光底物與輔助試劑。

2.根據權利要求1所述的PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒，其特征在于，所述標準品的制備方法為：用PBS緩沖液將PD-L1抗體標準品稀釋，分別制備成100ng/mL、50ng/mL、25ng/mL、12.5ng/mL、6.25ng/mL、3.125ng/mL、0ng/mL的梯度標準溶液。

3.根據權利要求1所述的PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒，其特征在于，所述鼠抗人PD-L1抗體I包被的免疫磁珠的制備方法：將活化磁珠與鼠抗人PD-L1抗體I孵育0.5-2h，加入BSA，采用MES清洗得到免疫磁珠。

4.根據權利要求3所述的PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒，其特征在于，所述活化磁珠的制備方法：將磁珠經MES緩沖液進行清洗，之后加入1-2％戊二醛/PBS震蕩反應0.5-2h，之后MES緩沖液進行清洗，得到活化磁珠。

5.根據權利要求4所述的PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒，其特征在于，所述磁珠的制備方法：二價鐵鹽與三價鐵鹽反應得到鐵鹽，所述鐵鹽與堿液反應得到磁珠。

6.根據權利要求1所述的PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒，其特征在于，所述酶標記的鼠抗人PD-L1抗體II制備：將鼠抗人PD-L1抗體II溶于NaCl，并與醛化辣根過氧化酶溶液混合；加入NaHCO₃緩沖液混合20-30h；加入賴氨酸，放置1-3h，得到酶標記的鼠抗人PD-L1抗體II。

7.根據權利要求6所述的PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒，其特征在于，所述醛化辣根過氧化酶溶液制備方法：取8-12mg辣根過氧化酶溶于1-2％戊二醛/PBS，室溫反應15-20h，之后采用PBS在2-5℃透析12h得到醛化辣根過氧化酶。

8.根據權利要求1所述的PD-L1的化學發光磁珠酶聯免疫法快速定量檢測試劑盒，其特征在于，所述化學發光底物的制備方法：分別配置化學發光底物A及化學發光底物B，使用前等體積混合；所述化學發光底物A包括魯米諾、對碘苯酚、苯甲酸鈉與Na₂HPO₃緩沖液；所述化學發光底物B包括苯甲酸鈉，乙二胺四乙酸二鈉鹽，過氧化脲，吐溫-20與Na₂HPO3緩沖液。