[發明專利]一種改進的重金屬鉛人工抗原的合成方法及DOTA在制備重金屬鉛人工抗原試劑中的用途

有效

• 申請號: 201711283494.9
• 申請日: 2017-12-07
• 公開（公告）號: CN107955069B
• 公開（公告）日: 2021-01-15
• 發明（設計）人: 金仁耀;郭建軍
• 申請（專利權）人: 浙江工商大學
• 主分類號: C07K14/765
• 分類號: C07K14/765;C07K14/77;C07K1/107
• 代理公司: 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283
• 代理人: 向慶寧

本發明提供了一種制備基于新型雙功能螯合劑DOTA的重金屬鉛的人工抗原的合成方法，以2?S?(4?氨基苯）?1,4,7,10四氮雜環壬烷?1,4,7,10?四乙酸為螯合劑，將鉛離子螯合劑復合物與載體蛋白牛血清白蛋白BSA或人血清白蛋白KHL偶聯，制備人工抗原。該方法在原來傳統基礎上增加了采用硼氫化鈉還原步驟，提高了偶聯效率。本發明還提供DOTA在制備重金屬鉛的人工抗原上的應用。

技術領域

本發明涉及一種采用新型雙功能螯合劑DOTA為連接載體的針對重金屬鉛的的人工抗原的合成技術,屬于免疫化學技術中的人工抗原制備技術領域，可用于后續高特異性抗重金屬鉛抗體的制備和免疫分析技術的研究，并用于環境樣品中微量和恒量重金屬鉛的檢測。

背景技術

重金屬污染主要指鉛、鎘、汞、鎳、鉻、砷、鋅等污染物。重金屬分布廣泛、難以降解，可通過大氣、水、食物鏈進入人體，與體內蛋白質及各種酶發生作用，使它們失去活性，并在某些器官中富集，如果超過人體所能耐受的限度，會造成人體急性或慢性中毒，具有致癌、致畸及致突變作用，對人體具有很大的危害。根據第一次全國污染源普查結果，2007年全國廢水中鉛、汞、鎘、鉻、砷等五種重金屬產生量為2.54萬噸，排放量897.3噸。大氣中上述五種重金屬污染物排放量約9500噸。列入國家危險廢物名錄中含上述五種重金屬的廢物產生量為1690萬噸，我國生態環境中重金屬的污染形勢非常嚴峻，污染事件時有發生，據統計，在2011年1到8月，全國發生了11起嚴重的重金屬污染事件，如云南曲靖鉻污染事故，廣西柳州的龍江河鎘污染事故，兒童血鉛超標事件等，重金屬污染事件對周邊生態環境的影響范圍之廣、對民眾生命健康的危害之大，引起了社會的高度關注。因此加強重金屬在環境、農產品和食品中殘留檢測成為保障重金屬安全的重要手段，而新形勢下檢測新技術的研究和開發顯得尤為迫切。

傳統的重金屬檢測方法多采用原子吸收光譜分析(Atomic AbsorptionSpectroscopy，AAS)、電感耦合等離子發射光譜(Inductively Coupledplasma AtomicEmission Spectroscopy，ICP-AES)、陽極溶出伏安法(Anodic Stripping Voltammetry,ASV)、色譜法和各種聯用檢測方法。這些方法雖然能對各種環境樣品中的重金屬離子進行有效分析，但大多需要大型儀器，分析方法成本高，樣品需要經過消解，分析時間長，不適于重金屬的現場快速檢測，難以適應環境及市場產品的現場抽查、生產企業自查及產品進出口快速通關的要求。

免疫學檢測技術具有檢測速度快、分析容量大、費用低廉、儀器簡單易攜、使用人員技術要求不高，容易普及和推廣、靈敏度高和選擇性強等優點，尤其適合現場篩選和大量樣品的快速分析，已成為21世紀最具競爭性和挑戰性的檢測分析技術。以該技術為基礎開發的一系列檢測產品，如ELISA檢測試劑盒、膠體金試紙條、免疫傳感器等已廣泛應用于現場樣品和大量樣品的快速檢測。

重金屬離子免疫檢測的關鍵在于抗重金屬特異性抗體的制備，而特異性抗體制備的關鍵又在于優質重金屬免疫原的合成。一方面，由于重金屬離子帶有電荷，能與動物體內生物分子發生強烈的不可逆反應，引起動物中毒反應；另一方面，重金屬的分子量低，不具有免疫原性，需將它與載體蛋白偶聯，才能形成完整的免疫原，但是由于重金屬離子直接與蛋白連接，會使蛋白質變性，因此，需利用雙功能螯合劑螯合重金屬離子，制備金屬-螯合劑復合物，將該復合物再與蛋白偶聯后制備完全抗原，進而免疫動物制備特異性抗體。采取的是一種開環式的雙功能螯合劑進行螯合，后再與載體蛋白偶聯制備人工抗原進行動物免疫和抗體的制備，在此基礎上建立不同的免疫分析技術和方法。