[發明專利]一種改進的重金屬鉛人工抗原的合成方法及DOTA在制備重金屬鉛人工抗原試劑中的用途有效
| 申請號： | 201711283494.9 | 申請日： | 2017-12-07 |
| 公開（公告）號： | CN107955069B | 公開（公告）日： | 2021-01-15 |
| 發明（設計）人： | 金仁耀;郭建軍 | 申請（專利權）人： | 浙江工商大學 |
| 主分類號： | C07K14/765 | 分類號： | C07K14/765;C07K14/77;C07K1/107 |
| 代理公司： | 杭州天昊專利代理事務所(特殊普通合伙) 33283 | 代理人： | 向慶寧 |
| 地址： | 310012 浙*** | 國省代碼： | 浙江;33 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 改進 重金屬 人工 抗原 合成 方法 dota 制備 試劑 中的 用途 | ||
【權利要求書】：
1.一種改進的重金屬鉛人工抗原的合成方法，其特征在于，以2-S-(4-氨基苯)-1,4,7,10四氮雜環壬烷-1,4,7,10-四乙酸為螯合劑，將鉛離子與載體蛋白牛血清白蛋白BSA或雞卵清蛋白OVA偶聯，偶聯方法如下：
稱取7mg 2-S-(4-氨基苯)-1,4,7,10四氮雜環壬烷-1,4,7,10-四乙酸，溶解于2ml，0.01mol/L，pH7.4 4-羥乙基哌嗪乙磺酸(HEPES)溶液，制備成螯合劑溶液，此反應液為A液；
稱取124.19mg硝酸鉛溶解于5ml超純水中，制備成7.5× 10-2M的硝酸鉛溶液，此反應液為B液；
吸取170μl的B液逐滴加入到A液中，室溫下避光反應3h，此反應液為C液；
向C液中逐滴加入630μl，20mM的戊二醛溶液，室溫避光反應過夜，此反應液為D液；
稱取20mg牛血清白蛋白BSA或雞卵清蛋白OVA溶解于3ml HEPES， 室溫下磁力攪拌混勻，此反應液為E液；
將D液逐滴加入到E液中，室溫下避光反應24h，后逐滴加入170μl硼氫化鈉溶液，室溫下避光反應1h；硼氫化鈉溶液的配制方法為：20mg硼氫化鈉溶解于200μl超純水中；
反應液先用8KD的透析袋透析3次，再用30KD的超濾離心管7500rpm離心4次，用8ml的0.01M，pH7.4的HEPES溶液復溶，后分裝，-20℃低溫保存。
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