[發明專利]一種檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合及試劑盒與應用

有效

• 申請號: 201711280578.7
• 申請日: 2017-12-05
• 公開（公告）號: CN107760788B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 張良祿;姚希輝;董蘭蘭
• 申請（專利權）人: 武漢艾米森生命科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳嘯寰

一種檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合及試劑盒與應用，屬于生物醫學檢驗技術領域。本發明提供的檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合能特異地檢測出宮頸癌相關基因的甲基化，利用該核酸組合制備檢測細胞基因甲基化的試劑盒，有效提高檢測的精度，能方便快捷的應用于檢測宮頸癌相關基因的甲基化水平，具有較高的靈敏度和特異性；應用該試劑盒可以方便檢測，提高檢測效率和檢測的精度，方便進行定量檢測，且操作簡單，利于推廣應用。

技術領域

本發明涉及生物醫學檢驗技術領域，且特別涉及一種檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合及試劑盒與應用。

背景技術

目前應用最廣泛的宮頸癌篩查方法遵循三階梯式診斷方法，主要內容為：初篩，細胞學(液基)、VIA/VILI檢查、高危型HPV檢測(HR-HPV)或16/18分型；陰道鏡：宮頸管診斷性刮宮或錐切，多點活檢；以及病理學診斷(即金標準)。然而，這些方法均存在自身的局限性，影響了篩查的效果。液基細胞學檢查的局限性表現在。(1)敏感性較低，有研究顯示，細胞學檢查在初篩過程中遺漏了約有一半的CIN2、CIN3及宮頸癌患者，常造成對患者的漏診漏治；(2)細胞學涂片的取材、制片、閱片水平參差不齊，缺乏規范化的質量控制，主觀依賴性強。高危型HPV檢測的局限性表現在：(1)高危型HPV的終生感染風險為80％，HPV檢測雖能提高靈敏度，但無法區分一過性HPV感染和致病性持續感染；(2)育齡期婦女，尤其是年齡小于30歲的女性HPV的感染率高，臨床提示意義較弱。單一依賴HPV篩查，其較低的特異性易造成有限的社會、醫療資源的浪費及對患者的過度治療。

發明內容

本發明的第一目的在于提供檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合，該核酸組合能特異的、高靈敏度檢測細胞基因甲基化。

本發明的第二目的在于提供上述的檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合在制備檢測細胞基因甲基化的試劑盒中的應用。

本發明的第三目的在于提供一種檢測宮頸細胞基因甲基化的試劑盒，可以方便的應用到基因甲基化的檢測中。

本發明解決其技術問題是采用以下技術方案來實現的。

一種檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合，核酸組合包括檢測引物對和檢測探針；檢測引物對包括用于檢測SOX1基因甲基化的第一引物對和用于檢測PAX1基因甲基化第二引物對；第一引物對的堿基序列如SEQ ID NO.1-2所示；第二引物對的堿基序列如SEQ IDNO.3-4所示；檢測探針5'端標記有熒光基團，檢測探針的3'端標記有淬滅基團；檢測探針包括檢測SOX1基因的第一探針和PAX1基因檢測的第二探針，第一探針的堿基序列如SEQ IDNO.5所示；第二探針的堿基序列如SEQ ID NO.6所示。

提供上述的檢測細胞基因甲基化的核酸組合在制備檢測細胞基因甲基化的試劑盒中的應用。

本發明還提供一種檢測宮頸細胞基因甲基化的試劑盒，包括上述的檢測細胞基因甲基化的核酸組合。

本發明的有益效果是：本發明提供的檢測細胞基因甲基化的核酸組合能特異地檢測出相關基因的甲基化，利用該核酸組合制備檢測細胞基因甲基化的試劑盒，有效提高檢測的精度，能方便快捷的應用于檢測相關基因的甲基化水平，具有較高的靈敏度和特異性；應用該試劑盒可以方便檢測，提高檢測效率和檢測的精度，方便進行定量檢測，且操作簡單，利于推廣應用。

附圖說明

為了更清楚地說明本發明實施例的技術方案，下面將對實施例中所需要使用的附圖作簡單地介紹，應當理解，以下附圖僅示出了本發明的某些實施例，因此不應被看作是對范圍的限定，對于本領域普通技術人員來講，在不付出創造性勞動的前提下，還可以根據這些附圖獲得其他相關的附圖。

圖1為本發明實驗例1提供的檢測靈敏度結果圖；

圖2為本發明實驗例2提供的ROC曲線圖；

圖3為本發明實驗例3提供的SOX1基因擴增線性圖；