[發明專利]一種檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合及試劑盒與應用

有效

• 申請號: 201711280578.7
• 申請日: 2017-12-05
• 公開（公告）號: CN107760788B
• 公開（公告）日: 2021-03-02
• 發明（設計）人: 張良祿;姚希輝;董蘭蘭
• 申請（專利權）人: 武漢艾米森生命科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6886
• 分類號: C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 吳嘯寰

1.一種檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合，其特征在于，所述核酸組合包括檢測引物對和檢測探針；所述檢測引物對包括用于檢測SOX1基因甲基化的第一引物對和用于檢測PAX1基因甲基化第二引物對；所述第一引物對的堿基序列如SEQ ID NO.1-2所示；所述第二引物對的堿基序列如SEQ ID NO.3-4所示；所述檢測探針5'端標記有熒光基團，所述檢測探針的3'端標記有淬滅基團；所述檢測探針包括檢測SOX1基因的第一探針和PAX1基因檢測的第二探針，所述第一探針的堿基序列如SEQ ID NO.5所示；所述第二探針的堿基序列如SEQID NO.6所示；

所述檢測引物對還包括檢測DLX1基因甲基化的第三引物對和第三探針、檢測DAPK1基因甲基化的第四引物對和第四探針、檢測ADCYAP1基因甲基化的第五引物對和第五探針、檢測ITGA4基因甲基化的第六引物對和第六探針、檢測mir124a基因甲基化的第七引物對和第七探針、檢測RXFP3基因甲基化的第八引物對和第八探針、檢測SOX17基因甲基化的第九引物對和第九探針以及檢測FAM19A4基因甲基化的第十引物對和第十探針；所述第三引物對至第十引物對的堿基序列如SEQ ID 7-22所示，所述第三探針至第十探針的堿基序列如SEQID 23-30所示。

2.根據權利要求1所述的檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合，其特征在于，所述熒光基團為FAM、VIC、TET、JOE、HEX、CY3、CY5、ROX、RED610、TEXASRED、RED670、NED中的一種。

3.根據權利要求2所述的檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合，其特征在于，所述淬滅基團為6-TAMRA、BHQ-1～3、和結合分子溝的非熒光淬滅劑中的一種。

4.如權利要求1-3任一項所述的檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合在制備檢測宮頸細胞基因甲基化的試劑盒中的應用。

5.一種檢測宮頸細胞基因甲基化的試劑盒，其特征在于，包括如權利要求1-3任一項所述的檢測宮頸細胞基因甲基化的核酸組合。

6.根據權利要求5所述的檢測宮頸細胞基因甲基化的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括核酸提取液、PCR反應緩沖液和PCR反應液中的一種或多種。

7.根據權利要求6所述的檢測宮頸細胞基因甲基化的試劑盒，其特征在于，所述核酸提取液包括80-150mmol/L的EDTA、蛋白酶K、8-14mmol/L的Tris飽和酚和12％-15％SDS溶液。

8.根據權利要求6所述的檢測宮頸細胞基因甲基化的試劑盒，其特征在于，所述PCR反應液為Taq DNA聚合酶、dNTPs和Mg²⁺的一種或多種。

9.根據權利要求5所述的檢測宮頸細胞基因甲基化的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括重亞硫酸鹽。