[發明專利]一種用于同時檢測三種禽病毒病的高通量試劑盒及其檢測方法和應用有效
| 申請號： | 201711276794.4 | 申請日： | 2017-12-06 |
| 公開（公告）號： | CN108085413B | 公開（公告）日： | 2021-09-21 |
| 發明（設計）人： | 周繼勇;閆麗萍;肖倩;雷靜 | 申請（專利權）人： | 南京農業大學 |
| 主分類號： | C12Q1/70 | 分類號： | C12Q1/70;C12Q1/686;C12Q1/6837;C12R1/93 |
| 代理公司： | 南京天華專利代理有限責任公司 32218 | 代理人： | 徐冬濤;李曉峰 |
| 地址： | 211225 江蘇省南京市溧*** | 國省代碼： | 江蘇;32 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關鍵詞： | 一種 用于 同時 檢測 種禽 病毒 通量 試劑盒 及其 方法 應用 | ||
1.一種用于同時檢測NDV、IBV和AIV及其H5、H7、H9亞型流感病毒的試劑盒，其特征在于：該試劑盒包括：
（1）用探針制備的基因芯片；
（2）洗液1：20×SSC；
（3）洗液2：10% SDS；
（4）洗液3：1M檸檬酸鈉；
（5）正向引物和反向引物；
（6）POD；
（7）一步法多重RT-PCR試劑；
（8）陽性對照樣品；
（9）底物顯色液；
所述的探針包括：
H9探針： TTCGACTGTCGCCTCATCTCTTG H7探針： GGTTTAGCTTCGGGGCATCATG H5探針： GCCTCAAACTGAGTGTTCATTTTGT M探針： TCGGCTTTGAGGGGGCCTGA IBV探針： CGCCCATCCTTAATACCTTCCTCA NDV探針： GAGGTGTCAAGYTCTTCTATCACAGAACC
所述的正向引物和反向引物包括：
H9-F： Biotin-CAGAACAAGAAGGCAGCAA H9-R： AATGTGATGACCARTGCATGG H7-F： Biotin-CCATTRCAATGGCTAGAAG H7-R： AATAGAATACAGATWGACCCAGT H5-F： Biotin-GTACCACCATAGCAATGAGCAG H5-R： AGTCCAGACATCTAGGAATCCGT M-F： Biotin-ATGAGYCTTCTRACCGAGGTCG M-R： GAGGTGACAGGATTGGTCTTGTC IBV-F： Biotin-GTARGGAGGGNAATTTTGGTGATGA IBV-R： ACACACTSRTCACAAATYTTYACATAATTA NDV-F： Biotin-GTCCCRAARGTRGTGACACA NDV-R： GGGAAYTGTCACTATYCTDGTACA
所述基因芯片的制備過程為：用點樣緩沖液將探針稀釋至工作濃度，點樣到iPDMS白膜制備基因芯片；所述點樣緩沖液的配方為：0.3M PB, 0.2%（v/v） Glycerin, 0.01%（v/v）Triton和質量分數為1.5%的 Mannitol。
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