[發(fā)明專利]精子活性氧類物質定量測定試劑盒及其用途和使用方法

在審

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711269951.9
• 申請日: 2017-12-05
• 公開（公告）號: CN108132213A
• 公開（公告）日: 2018-06-08
• 發(fā)明（設計）人: 胡家純;陶思恩;趙毅;劉少栩;楊紅芳;程浩
• 申請（專利權）人: 深圳市博銳德生物科技有限公司
• 主分類號: G01N21/01
• 分類號: G01N21/01;G01N21/78;G01N21/31
• 代理公司: 深圳市中知專利商標代理有限公司 44101
• 代理人: 張學群

本發(fā)明提供一種活性氧定量檢測試劑盒，包括氯化硝基四氮唑藍凍干粉、氯化硝基四氮唑藍溶解液、顯色劑A、顯色劑B、標準品；所述氯化硝基四氮唑藍凍干粉是濃度為0.1～1mmol/L的氯化硝基四氮唑藍藥液冷凍干燥后的粉末；所述氯化硝基四氮唑藍溶解液是濃度為0.01～0.5mol/L、pH為7.2～7.6的磷酸鹽緩沖液；所述顯色劑A是濃度為0.01～0.3mol/L的弱酸性緩沖液；所述顯色劑B是0.01％～2％三乙醇胺溶液；所述標準品為含有已知濃度為0～36mmol/L的過氧化氫溶液。本發(fā)明具有方法學清潔環(huán)保、能實現手工操作和自動化批量檢測、且操作簡單、易于臨床推廣應用的優(yōu)點。

技術領域

本發(fā)明涉及一種活性氧類物質定量檢測試劑盒及其用途，以及涉及利用這種試劑盒體外檢測人體精子活性氧類物質濃度的方法。

背景技術

精液活性氧(reactive oxygen species,簡稱ROS)類物質主要由精子自身和精液中的白細胞產生，在生殖系統(tǒng)內，抗氧化酶系統(tǒng)和非酶性抗氧化物成分使ROS的產生和清除保持動態(tài)平衡。適量的活性氧在精子功能上扮演著多種角色，維持精子細胞的正常功能，是精子獲能和頂體反應所必需的，但當ROS過量存在時，會導致細胞氧化應激反應，損傷機體的氧化防御系統(tǒng)，使精子運動功能改變、活力下降、死亡率升高，并影響精子的頂體反應及受精功能等。

現有技術中，在實驗室對精子活性氧類物質(ROS)進行定量測量的方法有硫代巴比妥酸(TBA)法、魯米諾化學發(fā)光法、辣根過氧化物酶法等。硫代巴比妥酸(TBA)法檢測不夠嚴謹，結果不精確，此法不便于評價活性氧的情況；魯米諾化學發(fā)光法為世界衛(wèi)生組織推薦的方法學，但操作過程中需使用到強酸性質的魯米諾，對操作者、環(huán)境產生危害；辣根過氧化物酶法需使用到酸性腐蝕品三氯乙酸，也會對操作者、環(huán)境產生危害，且需要在0℃超聲處理，臨床使用不方便。

發(fā)明內容

本發(fā)明要解決的技術問題是提供一種方法學清潔環(huán)保、能實現手工操作和自動化批量檢測、且操作簡單、易于臨床推廣應用的活性氧(ROS)定量檢測試劑盒，同時，本發(fā)明還提供其用途，以及一種利用該試劑盒檢測人體精液標本中活性氧濃度的方法。

為了解決上述技術問題，本發(fā)明提供一種活性氧定量檢測試劑盒，包括氯化硝基四氮唑藍凍干粉、氯化硝基四氮唑藍溶解液、顯色劑A、顯色劑B、標準品；

所述氯化硝基四氮唑藍凍干粉是濃度為0.1～1mmol/L的氯化硝基四氮唑藍藥液冷凍干燥后的粉末；所述氯化硝基四氮唑藍溶解液是濃度為0.01～0.5mol/L、pH為7.2～7.6的磷酸鹽緩沖液；所述顯色劑A是濃度為0.01～0.3mol/L的弱酸性緩沖液；所述顯色劑B是0.01％～2％三乙醇胺溶液；所述標準品為含有已知濃度為0～36mmol/L的過氧化氫溶液。

作為優(yōu)選方式，還包括微孔板條；所述氯化硝基四氮唑藍凍干粉為分裝于密封容器的多瓶，所述顯色劑A、顯色劑B、標準品分別獨立裝于瓶中。

作為優(yōu)選方式，所述顯色劑A為碳酸氫鈉溶液或醋酸鈉或磷酸二氫鉀或檸檬酸緩沖液。

作為優(yōu)選方式，所述氯化硝基四氮唑藍藥液的濃度為0.212mmol/L；所述氯化硝基四氮唑藍溶解液是濃度為0.05mol/L的磷酸鹽緩沖液；所述顯色劑A是濃度為0.25mol/L的碳酸氫鈉溶液；所述顯色劑B的濃度是1.62％的三乙醇胺溶液；所述標準品是濃度為36mmol/L的過氧化氫溶液。

本發(fā)明提供一種活性氧定量檢測試劑盒的用途，用于檢測成年男性精子活性氧類物質的含量。

本發(fā)明提供一種使用活性氧定量檢測試劑盒檢測精子活性氧的方法，包括如下步驟：

步驟一，將所取新鮮精液標本進行前處理，精子濃度記為M×10⁶/mL；