[發明專利]一種CYP2C19基因的快速擴增試劑盒及擴增方法

在審

• 申請號: 201711267084.5
• 申請日: 2017-12-05
• 公開（公告）號: CN109868306A
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 新開源鴻輝（廣州）生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

本發明公開了一種CYP2C19基因的快速擴增試劑盒及擴增方法，其中試劑盒內包括三對擴增引物、Taq酶、dNTPs和緩沖液，其中擴增引物用于擴增CYP2C19*2型、CYP2C19*3型和CYP2C19*17型中的至少兩個SNP位點，每對引物分別對應其中一個SNP位點的上下游區域。本發明采用多重PCR的擴增方法，同時擴增CYP2C19的多個重要SNP位點，且可以根據實際需要靈活選擇擴增的位點組合，可以起到一盒多用的作用，試劑盒中的引物特異性高，錯配率低，引物長度和T_m值設計合理，擴增產物便于檢測分離。一次擴增多條目的產物，不僅大大提高了擴增效率，降低了擴增成本。

技術領域

本發明涉及一種CYP2C19基因的快速擴增試劑盒及擴增方法，屬于生物領域，尤其是生物檢測領域。

背景技術

藥物代謝酶在藥物體內代謝過程中起著重要作用，其活性高低直接決定藥物作用的強度和持久性。細胞色素P450(CYP450)是人體內的藥物代謝主要的酶，參與了40％～50％上市藥物代謝，其活性強弱是決定藥物代謝速率的重要因素。

CYP2C19酶稱為S-美芬妥英-4-羥化酶，是細胞色素P450家族(CYP450)最重要的藥物代謝酶之一，CYP2C19的基因多態性影響著氯吡格雷、奧美拉唑、苯妥英鈉和地西泮等許多藥物的代謝。CYP2C19酶位于肝微粒體內，其編碼基因位于人類10號染色體q24.1-24.3位點，野生型為CYP2C19*1/*1型，具有正常酶活性，。但中國人群中常有基因突變，常見突變類型是CYP2C19*2型(第5外顯子G681A)和CYP2C19*3型(第4外顯子G636A)。CYP2C19*2型和CYP2C19*3型可引起CYP2C19基因編碼的酶活性喪失，代謝底物的能力減弱，使血藥濃度增高，在常規治療劑量時易引起蓄積中毒。中國人群中的弱代謝者99％為CYP2C19*2型和CYP2C19*3型等位基因。2006年Sim等發現了一種新的CYP2C19等位基因CYP2C19*17，帶有的突變位點是：–806C＞T。CYP2C19*17等位基因在人群中也有較高的頻率出現，CYP2C19*17型則引起CYP2C19基因編碼的酶活性增強，代謝底物的能力增強，因此需要增加藥物劑量。

目前臨床或實驗室檢測CYP2C19基因多態性的方法很多，包括測序法、基因芯片法和熒光定量PCR法等。但各種檢測方法均是針對單一的單核苷酸多態性位點(SNP)進行檢測的，檢測時間較長且檢測成本較高，但上述三個突變位點的突變頻率較高，單獨檢測不僅耗時費力且準確率低，難以在短時間內給出位點的定性結論。因而無法實時準確地給予被測者準確的代謝療效預測和用藥指導。

綜上，研發一款對CYP2C19基因CYP2C19*2、CYP2C19*3和CYP2C19*17這3個位點的多態性進行定性檢測的快速擴增盒及擴增檢測方法，是十分重要的。

發明內容

針對現有技術存在的上述問題，本發明的目的獲得一種CYP2C19基因的快速擴增試劑盒及擴增方法。

為實現上述發明目的之一，本發明采用的CYP2C19基因的快速擴增試劑盒的技術方案如下：

所述試劑盒內包括三對擴增引物、Taq酶、dNTPs和緩沖液，其中擴增引物用于擴增CYP2C19*2型、CYP2C19*3型和CYP2C19*17型中的至少兩個SNP位點，每對引物分別對應其中一個SNP位點的上下游區域。試劑盒中包含三對引物分別對應三個SNP位點，擴增時可以同時擴增三個SNP位點或任意選擇兩個位點進行擴增，使得試劑盒的使用更加靈活，并且三對引物經過精確設計，擴增效率高錯配低，擴增產物易檢測易分離，便于進一步的測序或檢測工作的順利進行。

CYP2C19*2型的擴增模板序列如序列表SEQ ID NO：1所示，CYP2C19*3型的擴增模板序列如序列表SEQ ID NO：2所示，CYP2C19*17型的擴增模板序列如序列表SEQ ID NO：3所示。