[發明專利]一種CYP2C19基因的快速擴增試劑盒及擴增方法

在審

• 申請號: 201711267084.5
• 申請日: 2017-12-05
• 公開（公告）號: CN109868306A
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 不公告發明人
• 申請（專利權）人: 新開源鴻輝（廣州）生物科技有限公司
• 主分類號: C12Q1/6858
• 分類號: C12Q1/6858
• 代理公司: 上海精晟知識產權代理有限公司 31253
• 代理人: 馮子玲

1.一種CYP2C19基因的快速擴增試劑盒，其特征在于，所述試劑盒內包括三對擴增引物、Taq酶、dNTPs和緩沖液，其中擴增引物用于擴增CYP2C19*2型、CYP2C19*3型和CYP2C19*17型中的至少兩個SNP位點，每對引物分別對應其中一個SNP位點的上下游區域。

2.根據權利要求1所述的CYP2C19基因的快速擴增試劑盒，其特征在于：CYP2C19*2型的擴增模板序列如序列表SEQ ID NO：1所示，CYP2C19*3型的擴增模板序列如序列表SEQ IDNO：2所示，CYP2C19*17型的擴增模板序列如序列表SEQ ID NO：3所示。

3.根據權利要求1所述的CYP2C19基因的快速擴增試劑盒，其特征在于，三對引物的引物序列如序列表SEQ ID NO：4～SEQ ID NO：9所示，其中SEQ ID NO：4和SEQ ID NO：5分別為CYP2C19*2型的上下游擴增引物，SEQ ID NO：6和SEQ ID NO：7分別為CYP2C19*3型的上下游擴增引物，SEQ ID NO：8和SEQ ID NO：9分別為CYP2C19*17型的上下游擴增引物。

4.根據權利要求1所述的CYP2C19基因的快速擴增試劑盒，其特征在于，所述擴增體系中，每個SNP位點的擴增引物和模板的加入量相同。

5.根據權利要求1所述的CYP2C19基因的快速擴增試劑盒，其特征在于，所述擴增試劑盒還包括全血樣品PCR緩沖液，所述緩沖液含有100mmol/L Tris-HCl，50mmol/L KCl，pH9.3～9.5。

6.一種采用如權利要求1～5任一項所述的CYP2C19基因的快速擴增試劑盒的擴增方法，其特征在于，所述擴增方法采用的擴增體系為25μL的PCR體系，具體為：

10×PCR buffer 2μL；

Mg²⁺(25mmol/L)1μL；

dNTPs(25mmol/L)0.6μL；

Taq酶(5U/μL)0.3μL；

CYP2C19*2型、CYP2C19*3型和/或CYP2C19*17型模板各2μL；

CYP2C19*2型、CYP2C19*3型和/或CYP2C19*17型上下游引物(10μmol/L)各1μL；其中引物與模板的類型和數量對應，

無菌雙蒸水補齊至25μL。

7.根據權利要求6所述的CYP2C19基因的快速擴增方法，其特征在于，所述擴增方法的反應條件為：94℃預變性5.5min；然后94℃變性30s，58℃退火45s，72℃延伸50s，36個循環后，再次72℃延伸5min。

8.根據權利要求6所述的CYP2C19基因的快速擴增方法，其特征在于：用于PCR擴增的DNA樣本為提取后的人全血樣品。

9.根據權利要求8所述的CYP2C19基因的快速擴增方法，其特征在于：當采用人全血樣品進行PCR擴增時，PCR擴增體系中緩沖液采用全血樣品PCR緩沖液。