[發(fā)明專利]菌株及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711266953.2
• 申請(qǐng)日: 2017-12-05
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107760639B
• 公開(kāi)（公告）日: 2020-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高圣風(fēng);桑利偉;劉愛(ài)勤;茍亞峰;孫世偉;王政;孟倩倩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A01N63/22;A01P3/00;C12R1/125
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳;趙青朵

1.菌株，其特征在于，其保藏編號(hào)為CGMCC NO. 14450。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的菌株在預(yù)防和/或治療胡椒瘟病的制劑中的應(yīng)用。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的應(yīng)用，其特征在于，所述菌株的有效濃度為1×10⁷~5×10⁷CFU/ml，每株根部澆灌3-5L，每畝澆灌 300~ 500 L。

4.如權(quán)利要求1所述菌株的發(fā)酵方法，其特征在于，將如權(quán)利要求1所述的菌株接種于LB培養(yǎng)基，于35~39℃、180~200rpm條件下震蕩培養(yǎng)12~16h，制備種子菌；將所述種子菌以3%比例接種于Landy培養(yǎng)基，于28~32℃、150~180rpm條件下發(fā)酵培養(yǎng)36~40h。

5.如權(quán)利要求4所述的發(fā)酵方法獲得的發(fā)酵液。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的發(fā)酵液在預(yù)防和/或治療胡椒瘟病的制劑中的應(yīng)用。

7.一種預(yù)防和/或治療胡椒瘟病的制劑，其特征在于，包括如權(quán)利要求1所述的菌株或如權(quán)利要求5所述的發(fā)酵液及可接受的輔料。

8.一種預(yù)防和/或治療胡椒瘟病的方法，其特征在于，將如權(quán)利要求1所述的菌株或如權(quán)利要求5所述的發(fā)酵液澆灌于胡椒根基部，活菌濃度為1×10⁷~5×10⁷CFU/ml；每株根部澆灌3-5L，每畝澆灌 300~ 500 L，每3個(gè)月澆灌1次。

9.一種如權(quán)利要求1所述菌株的遺傳轉(zhuǎn)化方法，其特征在于，將如權(quán)利要求1所述菌株依次接種于LB培養(yǎng)基、SPI培養(yǎng)基、SPII培養(yǎng)基培養(yǎng)，收集培養(yǎng)液依次與EGTA、轉(zhuǎn)化用DNA混合培養(yǎng)，離心，收集上清液重懸菌體，涂選擇平板；

步驟1、將如權(quán)利要求1所述菌株接種于LB培養(yǎng)基，200rpm 37℃ 震蕩培養(yǎng)10~12h；

步驟2、取250μl步驟1獲得的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接至SPI培養(yǎng)基中，200rpm 37℃ 搖床培養(yǎng)5.5~6.0h；

步驟3、取2.8ml步驟2獲得的培養(yǎng)液轉(zhuǎn)接至SPII培養(yǎng)基中，于100rpm 37℃ 震蕩培養(yǎng)1.5h；

步驟4、取步驟3獲得的培養(yǎng)液與250μl 100×EGTA混合，于100rpm 37℃ 震蕩培養(yǎng)10min；

步驟5、取步驟4獲得的培養(yǎng)液0.5 ml與轉(zhuǎn)化用DNA按1μg混合，于37℃ 100rpm 震蕩培養(yǎng)1~2h；

步驟6、50000~10000g 離心1~2 min，棄除2/3的上清液后重懸菌體，涂選擇平板，37℃過(guò)夜培養(yǎng)12~16h。