[發(fā)明專利]菌株及其應(yīng)用

有效

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711266953.2
• 申請(qǐng)日: 2017-12-05
• 公開（公告）號(hào): CN107760639B
• 公開（公告）日: 2020-03-31
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 高圣風(fēng);桑利偉;劉愛勤;茍亞峰;孫世偉;王政;孟倩倩
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 中國(guó)熱帶農(nóng)業(yè)科學(xué)院香料飲料研究所
• 主分類號(hào): C12N1/20
• 分類號(hào): C12N1/20;A01N63/22;A01P3/00;C12R1/125
• 代理公司: 北京集佳知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 11227
• 代理人: 張柳;趙青朵

本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，特別涉及菌株及其應(yīng)用。提供了預(yù)防和/或治療胡椒瘟病的菌株。平板拮抗試驗(yàn)結(jié)果顯示，枯草芽孢桿菌VR19對(duì)胡椒瘟病菌(Phytophthora capsici)的菌絲生長(zhǎng)具有良好的抑制效果。溫室盆栽試驗(yàn)結(jié)果顯示，枯草芽孢桿菌VR19灌根處理后，處理植株的胡椒瘟病發(fā)病率及平均病斑面積均有顯著降低，防效達(dá)68％。遺傳轉(zhuǎn)化試驗(yàn)結(jié)果顯示，枯草芽孢桿菌VR19使用配套的遺傳轉(zhuǎn)化方法后，能夠被穩(wěn)定高效的遺傳轉(zhuǎn)化，轉(zhuǎn)化效率可達(dá)200?300CFU/μg。

技術(shù)領(lǐng)域

本發(fā)明涉及微生物領(lǐng)域，特別涉及菌株及其應(yīng)用。

背景技術(shù)

胡椒瘟病是胡椒上的首要病害。由辣椒疫霉(Phytophthora capsici)引起，主要為害胡椒主蔓基部造成植株迅速萎蔫死亡，傳播迅速，是一種毀滅性很強(qiáng)的病害。該病害在我國(guó)胡椒種植區(qū)普遍發(fā)生，可造成50％以上的經(jīng)濟(jì)損失，嚴(yán)重時(shí)可以導(dǎo)致整塊胡椒園毀滅。目前，防治胡椒瘟病主要依賴化學(xué)農(nóng)藥。但是，化學(xué)藥劑的大量施用則存在抗藥性產(chǎn)生、農(nóng)藥殘留和環(huán)境破壞等隱患，不符合當(dāng)前的綠色生態(tài)發(fā)展的戰(zhàn)略。

利用生防芽孢桿菌防治胡椒瘟病，具有廣譜性好、藥效持久、對(duì)環(huán)境友好等特點(diǎn)，是極佳的綠色防控胡椒瘟病方法之一。目前國(guó)內(nèi)利用生防芽孢桿菌防治植物病害的應(yīng)用已經(jīng)十分普遍。在我國(guó)目前已登記的135個(gè)微生物殺菌劑產(chǎn)品中芽孢桿菌類產(chǎn)品數(shù)量的高達(dá)83個(gè)，但是尚未有防治胡椒瘟病的微生物殺菌劑產(chǎn)品。

遺傳操作是構(gòu)建高效基因工程菌株和研究其防病機(jī)理的必須手段，對(duì)生防菌的開發(fā)利用極為重要。但是，天然的野生型芽孢桿菌普遍存在著遺傳操作難題，大大限制了人們對(duì)生防芽孢桿菌的機(jī)理研究和改造利用。目前國(guó)內(nèi)外通常以“Bacillus subtilis 168”菌株為對(duì)象進(jìn)行遺傳操作及機(jī)理研究；但是該菌株于1835年被德國(guó)科學(xué)家埃倫伯格發(fā)現(xiàn)，已經(jīng)在近200年的人工培養(yǎng)過程中被逐步馴化，一些野生性狀出現(xiàn)缺陷突變。近年來，一些野生型芽孢桿菌陸續(xù)被報(bào)道可以進(jìn)行遺傳操作，例如，“B.subtilis 69”、“B.amyloliquefaciens FZB42”、“B.amyloliquefaciens CO6”等。但是這些菌株的依然遺傳操作困難，其遺傳轉(zhuǎn)化效率均遠(yuǎn)低于“B.subtilis 168”。容易遺傳操作的野生型生防芽孢桿菌極為欠缺。

發(fā)明內(nèi)容

有鑒于此，本發(fā)明提供一種菌株及其應(yīng)用。本發(fā)明的目的共有2點(diǎn):1)生物防治胡椒產(chǎn)業(yè)上危害最大的胡椒瘟病，通過平板拮抗試驗(yàn)和盆栽生防試驗(yàn)，篩選得到對(duì)胡椒瘟病防治效果良好的枯草芽孢桿菌VR19，防治效果大于70％；2)建立枯草芽孢桿菌VR19高效遺傳操作方法，針對(duì)該菌株特性建立了專門的遺傳操作方法，遺傳轉(zhuǎn)化效率大于200CFU/μg。

為了實(shí)現(xiàn)上述發(fā)明目的，本發(fā)明提供以下技術(shù)方案：

本發(fā)明提供了菌株，其保藏編號(hào)為CGMCC NO.14450。

本發(fā)明還提供了上述菌株在預(yù)防和/或治療胡椒瘟病的制劑中的應(yīng)用。

在本發(fā)明的一些具體實(shí)施方案中，所述菌株的有效濃度為1×10⁷～5×10⁷CFU/ml，每株胡椒根部澆灌3-5L，每畝澆灌300～500L。

本發(fā)明還提供了上述菌株的發(fā)酵方法，其特征在于，將如權(quán)利要求1所述的菌株接種于LB培養(yǎng)基，于35～39℃、180～200rpm條件下震蕩培養(yǎng)12～16h，制備種子菌；將所述種子菌以3％比例接種于Landy培養(yǎng)基，于28～32℃、150～180rpm條件下發(fā)酵培養(yǎng)36～40h。

本發(fā)明還提供了上述發(fā)酵方法獲得的發(fā)酵液。

本發(fā)明還提供了上述發(fā)酵液在預(yù)防和/或治療胡椒瘟病的制劑中的應(yīng)用。

本發(fā)明還提供了一種預(yù)防和/或治療胡椒瘟病的制劑，包括上述菌株或上述發(fā)酵液及可接受的輔料。