[發明專利]麻疹病毒mRNA甲基轉移酶缺陷減毒疫苗株及其應用

有效

• 申請號: 201711263696.7
• 申請日: 2017-12-04
• 公開（公告）號: CN108103097B
• 公開（公告）日: 2021-01-08
• 發明（設計）人: 趙正言;黃耀偉;汪一龍;李建榮
• 申請（專利權）人: 浙江大學
• 主分類號: C12N15/85
• 分類號: C12N15/85;C12N15/54;C12N7/04;A61K39/165;A61P31/14;C12R1/93
• 代理公司: 北京超凡志成知識產權代理事務所(普通合伙) 11371
• 代理人: 王宏

本發明涉及生物工程領域，具體而言，公開了一種麻疹病毒mRNA甲基轉移酶缺陷減毒疫苗株及其應用。本發明提供的麻疹病毒mRNA甲基轉移酶缺陷減毒疫苗株質粒，通過定點突變包含麻疹病毒減毒疫苗株S191基因組重組載體中的麻疹病毒L蛋白上的甲基轉移酶保守序列得到，可以降低拯救出來的麻疹病毒的復制能力，達到減弱病毒毒力的目的，且不會改變病毒的免疫原性。本發明提供的麻疹病毒mRNA甲基轉移酶缺陷減毒疫苗株，通過輔助質粒和上述麻疹病毒mRNA甲基轉移酶缺陷減毒疫苗株質粒拯救得到，該麻疹病毒mRNA甲基轉移酶缺陷減毒疫苗株致病力較低甚至高度致弱，同時能激發機體產生并維持高滴度的中和抗體，達到更好的免疫效果。

技術領域

本發明涉及生物工程領域，具體而言，涉及一種麻疹病毒mRNA甲基轉移酶缺陷減毒疫苗株及其應用。

背景技術

麻疹病毒(Measles virus，MV)屬于副粘病毒病毒科(Paramyxoviridae)，麻疹病毒屬(Morbillivirus)，為不分節段的單股負鏈RNA病毒，病毒顆粒呈多形態或球形，外部由囊膜包裹。麻疹是麻疹病毒引起的嚴重威脅公眾健康的急性傳染病，能夠引起嚴重的臨床癥狀，甚至導致患者死亡，屬于國家法定乙類傳染病。

國內所用的麻疹疫苗株為滬191(S191)株，滬191株生產的麻疹疫苗穩定性良好，其臨床安全性和免疫原性均良好，有效性和安全性已經得到明確的肯定，是中國麻疹疫苗的主要生產株。麻疹疫苗接種能激發持久的免疫應答，帶來長期的保護作用，遺傳性穩定同時無致病性的返祖現象。但最初制備麻疹疫苗的工藝復雜，需要在不同的細胞系中傳代許多次才能得到減毒的毒株，費時費力。同時，國內研究發現現有“滬191”麻疹疫苗對麻疹流行株保護能力正在下降，且接種疫苗株后仍會引起一定副反應，5％～15％的接種者會出現高于39℃的高熱，5％的接種者會出現皮疹。

有鑒于此，特提出本發明。

發明內容

本發明提供了一種麻疹病毒mRNA甲基轉移酶缺陷減毒疫苗株質粒，可通過體外定點突變技術對該質粒載體中麻疹病毒基因組的任意位點進行致弱突變，緩解現有技術中制備的麻疹疫苗株費時、費力、病毒毒力較高等問題。

為了解決接種麻疹疫苗后仍會引起一定副反應等問題，本發明提供了一種致病力進一步減弱的麻疹病毒mRNA甲基轉移酶缺陷減毒疫苗株，該疫苗株是以經典的麻疹病毒減毒株(S191)基因組為骨架，對其甲基轉移酶區域進行突變后，結合輔助質粒拯救獲得的重組疫苗。

本發明提供了一種上述麻疹病毒mRNA甲基轉移酶缺陷減毒疫苗株在制備具有高免疫力的減毒麻疹疫苗中的應用。

為了實現本發明的上述目的，特采用以下技術方案：

本發明提供了一種麻疹病毒mRNA甲基轉移酶缺陷減毒疫苗株質粒，通過定點突變包含麻疹病毒減毒疫苗株S191基因組重組載體中的麻疹病毒L蛋白上的甲基轉移酶保守序列得到。

進一步地，所述甲基轉移酶保守序列為麻疹病毒結構蛋白中的L蛋白第VI保守區的氨基酸序列。

進一步地，所述氨基酸序列包括K1766，G1788，G1790，G1792，D1881，K1917或E1954。

進一步地，所述包含麻疹病毒減毒疫苗株S191基因組重組載體為pYES-MV-S191。

進一步地，對所述pYES-MV-S191中G1788，G1790或G1792氨基酸分別進行G到A的突變得到麻疹病毒mRNA甲基轉移酶缺陷減毒疫苗株質粒pYES-MV-S191-G1788A、pYES-MV-S191-G1790A或pYES-MV-S191-G1792A。

進一步地，用于制備pYES-MV-S191-G1788A質粒的引物為：