[發(fā)明專利]檢測AR基因突變的引物和方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711261967.5 | 申請日： | 2017-12-04 |
| 公開（公告）號： | CN108018342A | 公開（公告）日： | 2018-05-11 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 桑志高;吳鵬飛;王淑一 | 申請（專利權(quán)）人： | 合肥艾迪康臨床檢驗所有限公司 |
| 主分類號： | C12Q1/6869 | 分類號： | C12Q1/6869;C12Q1/6886;C12N15/11 |
| 代理公司： | 浙江杭州金通專利事務(wù)所有限公司 33100 | 代理人： | 黃素萍 |
| 地址： | 230088 安徽省合*** | 國省代碼： | 安徽;34 |
| 權(quán)利要求書： | 查看更多 | 說明書： | 查看更多 |
| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 檢測 ar 基因突變 引物 方法 | ||
1.一種檢測AR基因突變的引物，其特征在于，所述擴增引物的核苷酸序列包括：
AR-F 5’-TGGCTTCCGCAACTTACACG-3’
AR-R 5’-CAGAAAGGATCTTGGGCACT-3’
所述測序引物的核苷酸序列包括：
AR-F 5’-TGGCTTCCGCAACTTACACG-3’
AR-R 5’-CAGAAAGGATCTTGGGCACT-3’。
2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物，其特征在于，所述擴增引物在如下擴增體系中使用：10μl的2×KOD Buffer，0.4μl的KOD酶，4μl的d NTP；10μM引物AR-F和10μM AR-R各0.5ul；3.6μl去離子水；1μl的cDNA模版。
3.使用一對引物檢測AR基因W741L/C、H874Y、F876L和T877A位點的基因突變情況的方法，包括以下步驟：
(1)提取人全血樣本中的RNA，逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA；
(2)利用擴增引物進行PCR擴增步，得到擴增產(chǎn)物；
(3)使用酶法純化PCR產(chǎn)物；
(4)利用測序引物進行Sanger測序，得到不同片段長度的測序產(chǎn)物；
(5)對得到的測序結(jié)果進行分析；
所述擴增引物的核苷酸序列包括：
AR-F 5’-TGGCTTCCGCAACTTACACG-3’
AR-R 5’-CAGAAAGGATCTTGGGCACT-3’
所述測序引物的核苷酸序列包括：
AR-F 5’-TGGCTTCCGCAACTTACACG-3’
AR-R 5’-CAGAAAGGATCTTGGGCACT-3’。
4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述擴增引物在如下擴增程序下進行：94℃5min；98℃10s，58℃25s，72℃25s，共40個循環(huán)；72℃2min。
5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測方法，其特征在于，測序反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性4min；95℃變性15s，50℃退火20s，60℃延伸2min，25個循環(huán)。
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