[發(fā)明專(zhuān)利]檢測(cè)AR基因突變的引物和方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711261967.5
• 申請(qǐng)日: 2017-12-04
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108018342A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 桑志高;吳鵬飛;王淑一
• 申請(qǐng)（專(zhuān)利權(quán)）人: 合肥艾迪康臨床檢驗(yàn)所有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): C12Q1/6869
• 分類(lèi)號(hào): C12Q1/6869;C12Q1/6886;C12N15/11
• 代理公司: 浙江杭州金通專(zhuān)利事務(wù)所有限公司 33100
• 代理人: 黃素萍

1.一種檢測(cè)AR基因突變的引物，其特征在于，所述擴(kuò)增引物的核苷酸序列包括：

AR-F 5’-TGGCTTCCGCAACTTACACG-3’

AR-R 5’-CAGAAAGGATCTTGGGCACT-3’

所述測(cè)序引物的核苷酸序列包括：

AR-F 5’-TGGCTTCCGCAACTTACACG-3’

AR-R 5’-CAGAAAGGATCTTGGGCACT-3’。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的引物，其特征在于，所述擴(kuò)增引物在如下擴(kuò)增體系中使用：10μl的2×KOD Buffer，0.4μl的KOD酶，4μl的d NTP；10μM引物AR-F和10μM AR-R各0.5ul；3.6μl去離子水；1μl的cDNA模版。

3.使用一對(duì)引物檢測(cè)AR基因W741L/C、H874Y、F876L和T877A位點(diǎn)的基因突變情況的方法，包括以下步驟：

(1)提取人全血樣本中的RNA，逆轉(zhuǎn)錄獲得cDNA；

(2)利用擴(kuò)增引物進(jìn)行PCR擴(kuò)增步，得到擴(kuò)增產(chǎn)物；

(3)使用酶法純化PCR產(chǎn)物；

(4)利用測(cè)序引物進(jìn)行Sanger測(cè)序，得到不同片段長(zhǎng)度的測(cè)序產(chǎn)物；

(5)對(duì)得到的測(cè)序結(jié)果進(jìn)行分析；

所述擴(kuò)增引物的核苷酸序列包括：

AR-F 5’-TGGCTTCCGCAACTTACACG-3’

AR-R 5’-CAGAAAGGATCTTGGGCACT-3’

所述測(cè)序引物的核苷酸序列包括：

AR-F 5’-TGGCTTCCGCAACTTACACG-3’

AR-R 5’-CAGAAAGGATCTTGGGCACT-3’。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于，所述擴(kuò)增引物在如下擴(kuò)增程序下進(jìn)行：94℃5min；98℃10s，58℃25s，72℃25s，共40個(gè)循環(huán)；72℃2min。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的檢測(cè)方法，其特征在于，測(cè)序反應(yīng)條件為：95℃預(yù)變性4min；95℃變性15s，50℃退火20s，60℃延伸2min，25個(gè)循環(huán)。