[發明專利]一種聯合檢測卵巢癌腫瘤標志物HE4和CA125的試劑盒及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711257970.X
• 申請日: 2017-12-04
• 公開（公告）號: CN108008132B
• 公開（公告）日: 2020-05-08
• 發明（設計）人: 劉承舉;劉向祎;路晟
• 申請（專利權）人: 北京惠中醫療器械有限公司;劉向祎
• 主分類號: G01N33/574
• 分類號: G01N33/574;G01N33/543;G01N33/535;G01N33/577
• 代理公司: 北京東方匯眾知識產權代理事務所(普通合伙) 11296
• 代理人: 張淑賢

本發明涉及免疫檢測技術領域，具體涉及一種聯合檢測卵巢癌腫瘤標志物HE4和CA125的試劑盒及其制備方法和應用。本發明試劑盒，將辣根過氧化物酶進行硅烷化處理，阻斷了辣根過氧化物酶成為堿性磷酸酶催化化學發光底物發光過程中磷酸受體的可能，解決了辣根過氧化物酶的存在會干擾堿性磷酸酶催化發光的問題，使得能夠首先采用化學發光底物液檢測磁微粒上堿性磷酸酶引起的發光強度大小，再采用顯色底物液檢測磁微粒上辣根過氧化物酶引起的顯色的吸光度的大小，實現對樣品中HE4和CA125的同時檢測。本發明試劑盒檢測過程簡單、反應時間短，試劑用量少，節約成本，靈敏度高、試劑重復性和穩定性好。

技術領域

本發明涉及免疫檢測技術領域，具體涉及一種聯合檢測卵巢癌腫瘤標志物HE4和CA125的試劑盒及其制備方法和應用。

背景技術

卵巢癌是婦科生殖系統的惡性腫瘤之一，其在婦科腫瘤中發病率僅次于子宮頸癌和子宮體癌位居第三位，但其致死率在婦科疾病中卻占據第一位。主要是因為卵巢深藏在骨腔內，卵巢癌早期癥狀十分不明顯，在臨床上也缺乏有效的早期診斷方法，很多患者在診斷出卵巢癌時已經是癌癥晚期。早期患者的五年生存率在百分之九十以上，而晚期的卻達不到百分之三十。因此，如何能盡早的診斷出卵巢癌對于患者的預后及生存極其關鍵。近幾年，學者們一直在尋找具有高特異性和準確性的腫瘤標記物，以提高卵巢癌的早期診斷率，保證患者的有效預后。

血清腫瘤標志物的檢測對于腫瘤的早期發現、病情的發展、治療后的評價、監測復發和轉移等方面都具有一定的應用價值。大多腫瘤標志物不僅僅針對一種癌癥，而且很多的癌癥也都有超過一種以上的腫瘤標志物。因此，每個樣品只檢測一種腫瘤標志物已不能滿足臨床診斷的需要，對于在同一樣品中，兩種或兩種以上的腫瘤標志物聯合檢測是目前發展的方向。

糖抗原125(CA125)是目前公認的卵巢癌術前診斷療效觀察術后復發和預后評估最具價值的觀測指標，但CA125的合成受許多因素影響，如子宮內膜異位癥，盆腔炎癥等均可見不同程度地升高，有研究發現40％-50％的I-II期卵巢癌患者的血清CA125檢測值并不升高，所以將CA125作為卵巢癌早期診斷唯一的指標仍有一定的局限性。

人附睪蛋白4(HE4，又名WFDC2)基因的cDNA最早由Kirchhoff等首先從附睪的上皮遠端分離出來，是一種可能與精子成熟度有關的蛋白酶抑制劑。目前已有大量實驗表明HE4在卵巢癌早期診斷中具有很高的應用價值。Drapkin等用免疫組織化學方法描述了HE4在不同組織類型卵巢癌中的表達，發現HE4在93％的卵巢漿液性癌、50％的卵巢透明細胞癌及100％卵巢子宮內膜樣癌中高表達，而在卵巢黏液性癌及正常卵巢組織中不表達。Moore等研究表明，就單一標志物而言，HE4用于診斷卵巢癌的敏感性高達72.9％、特異性達95％，而CA125的敏感性為27％-66％，特異性為75.2％。就聯合檢測物而言，CA125聯合HE4的檢測敏感性達76.4％、特異性95％，明顯高于單項檢測HE4或CA125的敏感度。Huhtinen等研究顯示聯合檢測HE4和CA125血清濃度可增加卵巢癌的診斷準確率，并可從卵巢子宮內膜異位囊腫中鑒別卵巢癌。Kim等研究顯示聯合檢測附件腫塊患者血清HE4和CA125水平可成功地將可能發展為卵巢癌的高風險組和低風險組患者區分開(敏感性87.5％，特異性93.8％)。因此，多數卵巢癌HE4和CA125水平會同時升高，二者的聯合檢測有利于提高卵巢癌的檢出率，有效改善了單一腫瘤標志物陰性導致的卵巢癌漏診，有效降低假陰性結果，大大增加了卵巢癌診斷的準確性。

免疫分析中，抗原-抗體免疫復合物的分離往往比較繁瑣、費時，常常是信噪比低的原因，引入磁性微粒子作為免疫反應與分離的固相載體，是目前的策略之一。磁性微粒子主要用于與抗體相連，通過免疫反應使其能夠捕獲靶物質形成免疫復合物，在外加磁場的作用下，免疫復合物被滯留下來，實現了分離，從而清除了樣品中基質的干擾，降低了背景值。而且，與微孔板的免疫分析相比，磁性微粒子的介入，不但使反應試劑的用量減少了約1/2，以及縮短了反應時間，更重要的是降低了背景值，提高了靈敏度。