[發(fā)明專利]魚類卵巢組織石蠟切片的制作方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711256841.9
• 申請(qǐng)日: 2017-12-04
• 公開（公告）號(hào): CN107917832A
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 陳劍杰;曹謹(jǐn)玲;羅永巨;高榮琨
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山西農(nóng)業(yè)大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N1/30
• 分類號(hào): G01N1/30
• 代理公司: 太原華弈知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所14108
• 代理人: 李毅

1.魚類卵巢組織石蠟切片的制作方法，步驟如下：

（1） 材料取樣 魚卵巢組織取樣材料的體積為：3.6-4 mm×3-3.3mm×3-3.3mm；

（2）組織固定 魚卵巢組織經(jīng)Zamboni’s固定液固定8小時(shí)后，流水沖洗6小時(shí)，洗去其固定液；

（3）脫水及透明 將（2）處理的組織依次用下列試劑處理：50%乙醇10min、70%乙醇15min、80%乙醇15min、95%乙醇90min、95%乙醇90min、無水乙醇2份+正丁醇1份60 min，無水乙醇1份+正丁醇1 份60 min、正丁醇45min、正丁醇45min；

（4）浸蠟 將經(jīng)（3）處理過的組織樣放入熔化好石蠟的浸蠟盒中進(jìn)行浸蠟，依次用下列試劑處理：正丁醇1份+:石蠟1份30min、石蠟90min、石蠟90min

（5）石蠟包埋 將經(jīng)（4）處理過的組織樣放入熔化好石蠟的包埋盒中進(jìn)行包埋，等石蠟自然冷卻凝固后，把包埋好的蠟塊從盒中取出修整；

（6）切片 將（5）修整好的蠟塊粘牢到準(zhǔn)備好的小木塊上，然后固定于切片機(jī)上，與切片刀調(diào)成平行，切成蠟帶；

（7）貼片和烤片 在（6）準(zhǔn)備的切片中，選擇有完整組織樣的蠟帶，蠟帶光滑面向下，放入40~42℃水浴箱中展片后，用多聚賴氨酸處理過的載玻片從水中撈出，使組織樣整齊排列在載玻片上，在切片作好標(biāo)記，放置在切片架上，烘箱45℃烤片5.5-6h，自然冷卻；

（8）脫蠟 將放有載玻片的切片架放入染色缸中，依次用下列試劑處理：二甲苯10min、二甲苯10min；

（9）復(fù)水 將經(jīng)（8）處理的切片依次用下列試劑處理：無水乙醇2min、無水乙醇2min、95%乙醇3min、80%乙醇3min、70%乙醇3min、自來水緩慢沖洗、蒸餾水2min；

（10）染細(xì)胞核 將配置好的Harris氏蘇木素液倒入染色缸，室溫下把經(jīng)（9）處理的切片放入染色缸10~20min，然后依次用下列試劑處理：自來水緩慢沖去浮色1min、1%鹽酸酒精分化10s、1%氨水10 s、蒸餾水1~2min；

（11）染細(xì)胞質(zhì) 將經(jīng)（10）染完細(xì)胞核的切片依次用下列試劑處理：伊紅染液5min、自來水緩慢沖洗浮色30s；

（12）脫水 將經(jīng)（11）的切片依次用下列試劑處理：70%乙醇30s、80%乙醇30s、95%乙醇2min、無水乙醇2min、無水乙醇2min；

（13）透明 將經(jīng)（12）的切片依次用下列試劑處理：二甲苯5min、二甲苯5min；

（14）封固 將經(jīng)（13）透明好的切片晾干后，滴中性樹膠，從一側(cè)慢慢放下蓋玻片，晾干后，用刀片刮去多余的樹膠即可。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魚類卵巢組織石蠟切片的制作方法，其特征在于，所述的Zamboni’s固定液由下列試劑配成，多聚甲醛25g，飽和苦味酸 200ml，Karasson-Schwlt’s磷酸鹽緩沖液至1000ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魚類卵巢組織石蠟切片的制作方法，其特征在于，所述的石蠟指熔點(diǎn)為52~56℃的鱗片狀切片石蠟。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的魚類卵巢組織石蠟切片的制作方法，其特征在于，所述的Harris氏蘇木素液由下列試劑配成，蘇木素2g，無水乙醇30ml，硫酸鋁鉀40g，蒸餾水500ml，紅色氧化汞1.5g，冰醋酸15ml。