[發明專利]血漿中花生四烯酸乙醇胺和2-花生四烯甘油含量的檢測方法及先兆流產診斷試劑盒

在審

• 申請號: 201711252470.7
• 申請日: 2017-12-01
• 公開（公告）號: CN108020625A
• 公開（公告）日: 2018-05-11
• 發明（設計）人: 荊蓮艷;許騁;霍志遠;俞東堃;樓敬偉
• 申請（專利權）人: 上海寶藤生物醫藥科技股份有限公司;上海寶藤醫學檢驗所有限公司;上海張江轉化醫學研發中心有限公司
• 主分類號: G01N30/88
• 分類號: G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 上海一平知識產權代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;崔佳佳

本發明提供一種超高效液相色譜?串聯質譜法檢測血漿中花生四烯酸乙醇胺(AEA)和2?花生四烯甘油(2?AG)含量的方法及先兆流產診斷試劑盒。將新鮮全血置于EDTA采血管保存，離心取上部血漿；向血漿中加入內標，用硫酸鋅的甲醇溶液處理，而后用乙酸乙酯和異丙醇萃取，用流動相重新分散溶解，得到待上樣檢測樣品；對待上樣檢測樣品利用超高效液相色譜?串聯質譜發進行分析，得到血漿樣品中AEA和2?AG的含量。本發明通過對先兆流產患者和正常孕婦血漿中AEA和2?AG含量的變化進行檢測，為先兆流產的診治以及后期的營養學支持提供重要參考。

技術領域

本發明涉及醫學生物檢測技術領域，具體地涉及血漿中花生四烯酸乙醇胺(AEA)和2-花生四烯甘油(2-AG)含量的檢測方法及先兆流產診斷試劑盒。

背景技術

先兆流產(Threatened abortion)是指婦女妊娠28周以前出現以陰道少量出血，伴小腹疼痛或腰酸脹痛，無妊娠物排出等為主要臨床表現的疾病。發生率約占20％，多數為早期流產。先兆流產群體的流產率是正常群體的2.6倍，17％的患者在懷孕后期會產生并發癥。先兆流產的發病原因較多，如環境、飲食、情緒等因素以及免疫、內分泌功能異常、生殖器官異常等均會對孕婦的妊娠過程產生影響，從而導致其發生流產。先兆流產對妊娠婦女的健康產生很大的威脅，因此對于先兆流產進行早期篩查和干預十分必要。

目前，先兆流產篩查方法主要是孕酮、人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)或雌二醇檢測。然而，單獨孕酮診斷早期先兆流產的靈敏度、陰性結果預期值、正確診斷率較低，分別為51.1％、65.55％、61.10％；β-HCG隨孕周變化波動范圍較大，需要連續測定兩次或兩次以上動態觀察β-HCG濃度上升的幅度，況且妊娠早期常無法鑒別β-HCG波動幅度；雌二醇也是妊娠初期分泌的主要激素之一，但其診斷靈敏度和特異度較低，分別為62.7％、21.7％。目前，先兆流產檢測項目少，而且要聯合B超、孕酮、人絨毛膜促性腺激素(β-HCG)或雌二醇多種檢測技術才能確診，因此仍需開發新的診斷方法，以提高先兆流產診斷的靈敏度和準確度。

秉承早發現早治療的原則，及早提示先兆流產風險，對于改善孕婦妊娠健康至關重要。

發明內容

本發明的目的在于提供一種2-花生四烯甘油(2-AG)或2-花生四烯甘油(2-AG)聯合花生四烯酸乙醇胺(AEA)或其檢測試劑的用途。

本發明的又一目的在于提供一種非診斷性檢測花生四烯酸乙醇胺(AEA)和2-花生四烯甘油(2-AG)含量的方法。

本發明的又一目的在于提供一種先兆流產診斷試劑盒。

在本發明的第一方面，提供了2-花生四烯甘油(2-AG)或2-花生四烯甘油(2-AG)聯合花生四烯酸乙醇胺(AEA)或其檢測試劑的用途，用于制備診斷先兆流產的試劑盒。

在另一優選例中，所述的判斷包括預先判斷。

在另一優選例中，所述檢測試劑盒的檢測樣本包括血液或組織。

在另一優選例中，所述的組織包括絨毛組織或蛻膜組織。

在另一優選例中，所述的檢測試劑包括：甲醇、乙腈、乙酸乙酯、異丙醇、硫酸鈉、乙酸銨、甲酸銨、AEA-d8和2-AG-d5。

在本發明的第二方面，提供了一種非診斷性檢測花生四烯酸乙醇胺(AEA)和2-花生四烯甘油(2-AG)含量的方法，包括步驟：

(1)提供一樣品，所述樣品包括來自于孕婦外周血的血液樣品；

(2)對步驟(1)中的樣品進行提取前處理，得到待上機檢測樣品；