[發(fā)明專利]血漿中花生四烯酸乙醇胺和2-花生四烯甘油含量的檢測(cè)方法及先兆流產(chǎn)診斷試劑盒

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711252470.7
• 申請(qǐng)日: 2017-12-01
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108020625A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 荊蓮艷;許騁;霍志遠(yuǎn);俞東堃;樓敬偉
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 上海寶藤生物醫(yī)藥科技股份有限公司;上海寶藤醫(yī)學(xué)檢驗(yàn)所有限公司;上海張江轉(zhuǎn)化醫(yī)學(xué)研發(fā)中心有限公司
• 主分類號(hào): G01N30/88
• 分類號(hào): G01N30/88;G01N30/06
• 代理公司: 上海一平知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限公司 31266
• 代理人: 徐迅;崔佳佳

1.2-花生四烯甘油(2-AG)或2-花生四烯甘油(2-AG)聯(lián)合花生四烯酸乙醇胺(AEA)或其檢測(cè)試劑的用途，其特征在于，用于制備診斷先兆流產(chǎn)的試劑盒。

2.一種非診斷性檢測(cè)花生四烯酸乙醇胺(AEA)和2-花生四烯甘油(2-AG)含量的方法，其特征在于，包括步驟：

(1)提供一樣品，所述樣品包括來(lái)自于孕婦外周血的血液樣品；

(2)對(duì)步驟(1)中的樣品進(jìn)行提取前處理，得到待上機(jī)檢測(cè)樣品；

(3)對(duì)步驟(2)中待上機(jī)檢測(cè)樣品采用超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法進(jìn)行分析，從而獲得所述待分析樣品中花生四烯酸乙醇胺(AEA)和2-花生四烯甘油(2-AG)含量。

3.根據(jù)權(quán)利要求2所述的方法，其特征在于，所述提取前處理包括步驟：

(a)向血漿加入第一萃取液和10～100ul的內(nèi)源性大麻素同位素內(nèi)標(biāo)，均質(zhì)后離心，離心后得到體積為V1的上清液1；

(b)將離心得到的上清液1經(jīng)氮?dú)獯抵馏w積V2，后用第二萃取劑于室溫萃取，然后離心取上清液2并氮?dú)獯蹈桑脧?fù)溶劑重新分散，得到待上機(jī)檢測(cè)樣品。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述檢測(cè)為超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法檢測(cè)。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的方法，其特征在于：所述第二萃取劑選自下組：乙酸乙酯和異丙醇混合溶液，乙酸乙酯，二甲苯，甲苯，氯仿，甲醇和氯仿或其組合。

6.根據(jù)權(quán)利要求5所述的方法，其特征在于：所述乙酸乙酯和異丙醇混合溶液中乙酸乙酯和異丙醇體積比為(6.5～9.0):(1.0～3.5)。

7.根據(jù)權(quán)利要求4所述的方法，其特征在于：所述的超高效液相色譜的工作條件包括：流動(dòng)相A是乙酸銨水溶液，流動(dòng)相B是乙酸銨甲醇水溶液，流動(dòng)相采用梯度流速，初始流速為0.09-0.59ml/min，較佳地為0.32～0.46ml/min；進(jìn)樣量為為1.9-9.9μl，較佳地為3～8μl。

8.一種先兆流產(chǎn)診斷試劑盒，其特征在于：該試劑盒包括：

(i)用于提取血漿中花生四烯酸乙醇胺(AEA)和2-花生四烯甘油(2-AG)的試劑；

(ii)用于制備超高效液相色譜-串聯(lián)質(zhì)譜法所需預(yù)處理試劑和流動(dòng)相試劑；以及，

(iii)標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)，所述標(biāo)簽或說(shuō)明書(shū)注明所述試劑盒用于檢測(cè)或診斷先兆流產(chǎn)。

9.根據(jù)權(quán)利要求8所述的試劑盒，其特征在于：所述流動(dòng)相包括流動(dòng)相A和流動(dòng)相B，所述流動(dòng)相A選自：2.4～3.8mM乙酸銨水溶液，0.1～0.5％甲酸水溶液，1～5mM甲酸銨水溶液，超純水；所述流動(dòng)相B選自：1.2～2.6mM乙酸銨甲醇水溶液，0.1～0.5％甲酸甲醇溶液，1～5mM甲酸銨甲醇溶液，純甲醇溶液。

10.根據(jù)權(quán)利要求9所述的試劑盒，其特征在于：所述的甲醇水溶液中甲醇與水的體積比為(4.9～9.9):(0.1～5.1)，較佳地為(7.5～9.5):(0.5～2.5)。