[發明專利]一種準確計數無脊椎動物血淋巴中微生物的豐度的方法

有效

• 申請號: 201711249372.8
• 申請日: 2017-12-01
• 公開（公告）號: CN108034691B
• 公開（公告）日: 2021-08-06
• 發明（設計）人: 李升康;張新旭;張明;張旭昇;孫再橋
• 申請（專利權）人: 汕頭大學
• 主分類號: C12Q1/06
• 分類號: C12Q1/06
• 代理公司: 廣州三環專利商標代理有限公司 44202
• 代理人: 溫旭;張澤思

本發明公開了一種準確計數無脊椎動物血淋巴中微生物的豐度的方法。步驟：用75%乙醇對取血部位進行消毒，用1 mL注射器抽取血淋巴，將血淋巴以1:1的體積比與ACD抗凝劑混合。用5μm孔徑濾膜過濾去除血淋巴中的血細胞，將獲得的濾液再過濾0.2μm孔徑濾膜。用SYBR^?Green I熒光染液染色0.2μm孔徑濾膜，然后對其制片后在熒光顯微鏡上進行觀測。統計每個視野中的微生物數量，最后根據公式計算血淋巴中微生物的豐度。本發明方法可準確計數擬穴青蟹、凡納濱對蝦和葡萄牙牡蠣等無脊椎動物血淋巴中包括可培養微生物和未培養微生物在內的所有微生物，其計數結果比平板菌落計數法高約2個數量級，其變異系數也明顯低于平板菌落計數法。本發明方法具有計數準確度高、抗干擾能力強、出結果快、應用廣泛等優點。

技術領域

本發明涉及計數微生物豐度的方法，具體地說是一種準確計數無脊椎動物血淋巴中微生物的豐度的方法。

背景技術

擬穴青蟹（Scylla paramamosain，簡稱青蟹）是廣鹽廣溫性的海洋經濟甲殼動物，它是我國青蟹屬的優勢種，其個體大、肉味甘美，營養與經濟價值高。青蟹主要分布于廣東、福建、浙江、廣西和海南沿岸海域，是我國最重要的海水養殖蟹類之一（林琪等，2007），目前青蟹年產量超過14萬噸、年產值愈100億，在我國海水魚類和海水甲殼動物養殖產量中位居第二（王桂忠等，2016）。

凡納濱對蝦（Litopenaeus vannamei）原產于太平洋西岸的拉丁美洲，其甲殼較薄，蝦體呈青灰色或青藍色。凡納濱對蝦食性廣，環境適應能力強，能在溫度13~40℃，鹽度2-34的環境中存活（徐國方，2008）。凡納濱對蝦是我國養殖產量最大的蝦類，2015 年我國凡納濱對蝦養殖產量占當年對蝦總產量的 85.85%，達到162.524 萬噸（2016年《漁業統計年鑒》）。

葡萄牙牡蠣（Crassostrea angulata）屬軟體動物門（Mollusoa），雙殼綱（Bivalvia），主要養殖在我國南方，喜好高溫高鹽環境（林清，2013）。牡蠣肉味鮮美，營養豐富，是目前我國乃至世界產量最大的經濟貝類。2016 年《漁業統計年鑒》顯示，牡蠣年產量為457.33萬噸，在我國海水貝類養殖產量中位居第一。