[發明專利]一種氯唑磷半抗原制備方法及其應用

在審

• 申請號: 201711246773.8
• 申請日: 2017-12-01
• 公開（公告）號: CN108051583A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發明（設計）人: 吳鵬
• 申請（專利權）人: 吳鵬
• 主分類號: G01N33/533
• 分類號: G01N33/533;G01N33/58;G01N33/559
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

本發明公開了一種檢測氯唑磷的半抗原制備方法，以及它在時間分辨熒光試紙條和膠體金免疫層析試紙條中的應用。本發明的時間分辨熒光試紙條和膠體金免疫層析試紙條具有靈敏度高、準確度高、精密度高、成本低、操作簡單、檢測時間短、適合各種單位使用、儲存簡單、保質期長的優點，能同時快速檢測大批量樣品，可實現現場高通量快速檢測。本發明提供的時間分辨熒光試紙條和膠體金免疫層析試紙條，適用于測定胡蘿卜、白菜、糙米、黃瓜、蘋果、柑橘等樣品中氯唑磷的殘留量。

技術領域

本發明涉及一種氯唑磷半抗原制備方法及其應用，例如在時間分辨熒光試紙條和膠體金免疫層析試紙條中的應用，屬于快速檢測技術領域，用于胡蘿卜、白菜、糙米、黃瓜、蘋果、柑橘等樣品中氯唑磷的含量檢測。

背景技術

氯唑磷純品為黃色液體，可溶于甲醇、三氯四烷等有機溶劑，水中溶解度僅150mg/L。中性及酸性介質中穩定，堿性條件下易分解。氯唑磷是瑞士汽巴-嘉基公司于1973年開發的一種有機磷類殺蟲、殺線蟲劑，英文通用名稱：isazofos，商品名稱：米樂兒，有觸殺、胃毒和內吸作用。用于玉米、棉花、水稻、甜菜、草坪和蔬菜上，防治各種線蟲、螟蟲、葉甲、麗金龜等地上和地下害蟲。該藥物在蔬菜上的殘留會在人體內聚積，對人體健康危害。GB2763-2014《食品安全國家標準食品中農藥最大殘留限量》中規定氯唑磷在糙米的最大殘留限量為0.05mg/kg，蔬菜和水果的最大殘留限量為0.01mg/kg。

目前，檢查該藥物的方法主要是質譜法等儀器方法，儀器檢測方法的精確度較高，但是儀器昂貴，需要專業的技術人員，檢測步驟復雜，難以批量檢測樣品，不適用于基層實驗室批量、快速檢測樣品。而免疫學檢測方法操作簡單、快速、靈敏，可同時檢測多數樣品，是理想的快速篩選手段。

發明內容

本發明的目的是提供一種氯唑磷半抗原制備方法，以及它在時間分辨熒光試紙條和膠體金免疫層析試紙條(簡稱“膠體金試紙條”)中的應用。

本發明所提供了一種檢測氯唑磷的時間分辨熒光試紙條，該試紙條包括樣品吸收墊、反應膜以及吸水墊三部分。反應膜位于中間，樣品吸收墊與吸水墊分別搭接于反應膜左右兩端。其中，樣品吸收墊上設有加樣區和微球區，微球區上載有時間分辨熒光微球；反應膜上設有檢測線(T線)和質控線(C線)，T線接上包被氯唑磷抗原，C線包被抗兔抗體。

所述氯唑磷時間分辨熒光微球，包括檢測微球和質控微球，檢測微球為表面包被有氯唑磷單克隆抗體的熒光微球，質控微球為表面包被有兔抗標記蛋白的熒光微球。

所述熒光微球中填充了斕系元素化合物；較優的，該斕系元索鰲合物為銪鰲合物；最優的，該銪鰲合物可為Eu(TTA)3/TOPO或Eu(TTA)3/Phen。

所述蛋白可以是牛血清Y-球蛋白(BGG)或小牛血清白蛋白(BSA)。

所述時間分辨熒光微球粒徑范圍為100-1000nm。

所述硝酸纖維素膜上，T線上包被的抗體為氯唑磷抗原，C線上包被的抗兔抗體。

所述氯唑磷時間分辨熒光免疫定量檢測試紙條底部設有塑料底板。

所述T線接上包被氯唑磷抗原是由氯唑磷半抗原與載體蛋白偶聯得到，所述載體蛋白可為牛血清白蛋白、卵清蛋白、血藍蛋白、甲狀腺蛋白、人血清白蛋白。

所述氯唑磷單克隆抗體是以氯唑磷半抗原-載體蛋白偶聯物作為免疫原制備獲得，是由氯唑磷單克隆抗體雜交瘤細胞株分泌獲得；所述抗兔抗體是將兔源抗體免疫羊得到。

所述樣品吸收墊為Fusion5膜或其他功能相同的膜；所述結合物釋放墊可為玻璃棉或聚酯材料；所述吸水墊為吸水墊；所述反應膜可為硝酸纖維素膜或醋酸纖維素膜。

本發明的另一個目的是提供一種制備上述試紙條的方法，其包括步驟：

(1)質控微球制備：