[發(fā)明專利]一種氯唑磷半抗原制備方法及其應(yīng)用

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711246773.8
• 申請(qǐng)日: 2017-12-01
• 公開（公告）號(hào): CN108051583A
• 公開（公告）日: 2018-05-18
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 吳鵬
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 吳鵬
• 主分類號(hào): G01N33/533
• 分類號(hào): G01N33/533;G01N33/58;G01N33/559
• 代理公司: 暫無(wú)信息
• 代理人: 暫無(wú)信息

1.一種氯唑磷半抗原的制備方法，其特征在于：

(1)將20ml無(wú)水乙醇倒入單口瓶中，攪拌，≤0℃，緩慢滴加5g三氯硫磷，反應(yīng)30min，加入20ml水，移入分液漏斗，萃取，分層；取下層有機(jī)相，無(wú)水硫酸鈉干燥，備用；

(2)將16.1g異唑醇溶于50ml乙酸乙酯中，加入16.5ml三乙胺，攪拌溶解；≤0℃滴加第一步產(chǎn)物18g，滴畢緩慢升至室溫；攪拌反應(yīng)8h；加入100ml冰水，移入分液漏斗，乙酸乙酯萃??；干燥，蒸干溶劑，柱層析純化，得到26.1g目標(biāo)物，收率86％；

(3)將上一步產(chǎn)物15.2g溶于50ml乙酸乙酯中，加入9ml三乙胺，攪拌溶解；滴加7.3g氨基丙酸叔丁酯的20ml乙酸乙酯溶液；室溫?cái)嚢柽^(guò)夜；加入100ml水，移入分液漏斗，乙酸乙酯萃?。桓稍?，蒸干溶劑，柱層析純化，得到19g目標(biāo)物，收率92％；

(4)將上一步產(chǎn)物18g，溶于20ml TFA中，室溫?cái)嚢?h；蒸干溶劑，柱層析純化，得13.2目標(biāo)物，收率85％，即得到氯唑磷半抗原。

2.如權(quán)利要求1所述的一種氯唑磷半抗原的制備方法，其特征在于所述氯唑磷半抗原的分子結(jié)構(gòu)式為：

3.如權(quán)利要求1所述的一種氯唑磷半抗原的制備方法，其特征在于所述氯唑磷半抗原能夠制備免疫原，所述免疫原的制備方法如下：

將133mg BSA溶于5ml 0.01M PBS，攪拌溶解；氯唑磷半抗原與BSA比例可在1∶1～60∶1的范圍內(nèi)調(diào)整，本申請(qǐng)選擇在加入35.6mg氯唑磷半抗原(與BSA摩爾比為50∶1)，加入EDC鹽酸鹽10mg，室溫?cái)嚢?h；移入透析袋中透析48h，得到氯唑磷免疫原。

4.如權(quán)利要求1所述的一種氯唑磷半抗原的制備方法，其特征在于所述氯唑磷半抗原能夠制備包被原，所述包被原的制備方法如下：

將86mg OVA溶于5ml 0.01M PBS，攪拌溶解；氯唑磷半抗原與OVA比例可在1∶1～40∶1的范圍內(nèi)調(diào)整，本申請(qǐng)選擇在加入28.5mg氯唑磷半抗原(與OVA摩爾比為40∶1)，加入EDC鹽酸鹽10mg，室溫?cái)嚢?h；移入透析袋中透析48h，得到氯唑磷包被原。

5.如權(quán)利要求1所述的一種氯唑磷半抗原的制備方法，其特征在于所述氯唑磷半抗原能夠用于制備一種檢測(cè)氯唑磷的時(shí)間分辨熒光試紙條，包括樣品吸收墊、反應(yīng)膜以及吸水墊，其特征在于所述反應(yīng)膜位于中間，樣品吸收墊與吸水墊分別搭接于反應(yīng)膜左右兩端；所述樣品吸收墊上設(shè)有加樣區(qū)和微球區(qū)，微球區(qū)上載有氯唑磷時(shí)間時(shí)間分辨熒光微球；所述反應(yīng)膜上設(shè)有檢測(cè)線(T線)和質(zhì)控線(C線)，T線接上包被氯唑磷抗原(包被原)，C線包被抗兔抗體。

6.如權(quán)利要求1所述的一種氯唑磷半抗原的制備方法，其特征在于所述氯唑磷半抗原能夠用于制備一種檢測(cè)氯唑磷的膠體金免疫層析試紙條，所述試紙條包括樣品吸收墊、膠體金墊、反應(yīng)膜和吸水墊，所述反應(yīng)膜上有檢測(cè)區(qū)和質(zhì)控區(qū)，所述檢測(cè)區(qū)包被氯唑磷抗原(包被原)。

7.一種檢測(cè)胡蘿卜、白菜、糙米、黃瓜、蘋果、柑橘等樣品中氯唑磷殘留的方法，其包括步驟：

1)樣本前處理；

2)用權(quán)利要求5-6任一項(xiàng)所述的試紙條進(jìn)行檢測(cè)；

3)分析檢測(cè)結(jié)果。