[發明專利]一種從微生物發酵液中分離純化胞二磷膽堿鈉的方法

在審

• 申請號: 201711246729.7
• 申請日: 2017-12-01
• 公開（公告）號: CN109836468A
• 公開（公告）日: 2019-06-04
• 發明（設計）人: 時銘;王欣彤
• 申請（專利權）人: 蘇州華賽生物工程技術有限公司
• 主分類號: C07H19/10
• 分類號: C07H19/10;C07H1/06
• 代理公司: 蘇州廣正知識產權代理有限公司 32234
• 代理人: 孫茂義

1.一種從微生物發酵液中分離純化胞二磷膽堿鈉的方法，其特征在于：包括以下步驟：

（1）胞二磷膽堿發酵液經加熱，絮凝，固液分離得到清液，清液經超濾、納濾連續式預處理得到預處理液；

（2）預處理液通過預柱進行預處理，流出液經純化柱吸附，再經氯化鈉溶液洗脫，洗脫液合并后再經減壓濃縮、醇沉結晶，得到胞二磷膽堿鈉粗品；

（3）將胞二磷膽堿鈉粗品溶解，經活性炭脫色后過濾，過濾清液經真空減壓濃縮，醇沉結晶后真空干燥，得到胞二磷膽堿鈉成品。

2.根據權利要求1所述的發酵液中分離純化胞二磷膽堿鈉的方法，其特征在于：所述的微生物發酵液為大腸桿菌發酵液。

3.根據權利要求2所述的發酵液中分離純化胞二磷膽堿鈉的方法，其特征在于：所述胞二磷膽堿大腸桿菌發酵液加熱后，加入絮凝劑絮凝，加熱溫度為70-100℃，加熱時間30-60min。

4.根據權利要求1或3所述的從微生物發酵液中分離純化胞二磷膽堿鈉的方法，其特征在于：所述絮凝劑為酸溶性殼聚糖或者聚乙烯亞胺，用量為0.05-1%。

5.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化胞二磷膽堿鈉的方法，其特征在于：所述步驟（1）中固液分離方式為板框過濾或者管式離心分離，或者100000-500000道爾頓的陶瓷膜微濾；固液分離所得清液經2000-20000道爾頓的超濾膜超濾，100-500道爾頓的納濾膜納濾。

6.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化胞二磷膽堿鈉的方法，其特征在于：所述步驟（2）中預處理液調節pH2-14；所述洗脫液調節pH5.5-7.5。

7.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化胞二磷膽堿鈉的方法，其特征在于：所述步驟（2）中減壓濃縮至胞二磷酸膽堿鈉濃度為200-400g/L；結晶條件是：加入料液體積4-6倍的乙醇，于4-25℃、80-120rpm的條件下攪拌12-24h；晶體過濾后用60-90%乙醇按體積比1:1淋洗。

8.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化胞二磷膽堿鈉的方法，其特征在于：所述預柱為強堿性陰離子交換樹脂，所述純化柱為強堿性陰離子交換樹脂。

9.根據權利要求8所述的從大腸桿菌發酵液中分離純化胞二磷膽堿鈉的方法，其特征在于：所述強堿性陰離子交換樹脂為201*7、201*4、202中的一種或幾種；上柱流速1-5BV/h，洗脫流速0.5-3BV/h；所述氯化鈉溶液濃度為0.05-0.5mol/L。

10.根據權利要求1所述的從微生物發酵液中分離純化胞二磷膽堿鈉的方法，其特征在于：所述步驟（3）中，將胞二磷膽堿鈉粗品復溶于去離子水至30-200g/L，活性炭常溫脫色30min后經過0.22μm濾膜過濾，減壓濃縮至200-400g/L；結晶條件是：加入料液體積4-8倍的乙醇，于4-25℃、80-120rpm的條件下攪拌12-24h；晶體過濾后用60-90%乙醇按體積比1:1淋洗；真空干燥溫度為40-45℃。