[發明專利]抗HIV-1基因、該基因的應用、具有該基因的DC疫苗及疫苗制備方法

有效

• 申請號: 201711239836.7
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN107955815B
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發明（設計）人: 劉明錄;王立新;馮建海;金海鋒;盧永燦;韓國英;馬洪華;萬磊;張傳鵬;強邦明;劉敏;韓慶梅;王亮
• 申請（專利權）人: 山東興瑞生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/867;A61K39/21;A61P31/18
• 代理公司: 濟南誠智商標專利事務所有限公司 37105
• 代理人: 侯德玉

本發明公開了抗HIV?1基因、該基因的應用、具有該基因的DC疫苗及疫苗制備方法，所述基因由GM?CSF核酸人工序列與gp120?CD4模塊串聯組成，所述gp120?CD4模塊含有以下基因片段中的至少一條；(1)gp120(B)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列；(2)gp120(C)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列；(3)gp120(AE)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列。本發明為將gp120與CD4類似物或CD4“迷你蛋白”連接在一起，使其構象發生改變并在CD4結合位點上暴露出抗原表位，使抗體識別并與暴露出的抗原相結合，從而刺激機體產生細胞免疫和體液免疫反應。

技術領域

本發明涉及基因技術領域，尤其涉及抗HIV-1基因、該基因的應用、具有該基因的DC疫苗及疫苗制備方法。

背景技術

艾滋病(acquired immunodeficiency syndrome，AIDS)是由Ⅰ型人類免疫缺陷病毒(human immunodeficiency virus 1，HIV-1)感染引起的一種死亡率極高的慢性傳染病，已成為威脅人類最嚴重的病毒病之一。據世界衛生組織的估計，目前全球約有4000萬人受艾滋病病毒感染，其中200萬為兒童，死亡人數達到3500萬。目前已有40多種HIV疫苗用于預防或治療艾滋病，包括滅活疫苗、減毒活疫苗、重組亞單位疫苗、重組活載體疫苗、DNA疫苗，但由于HIV-1(HIV)變異快、亞型多、攻擊自身免疫系統等特點，HIV疫苗雖已進入臨床試驗但是均未達到預期的效果，從而限制了其應用。因此，迫切需要研發一種安全、有效、具有良好免疫保護作用的HIV疫苗。

目前，發現艾滋病、結核及乙型肝炎等一些慢性疾病在持續性、周期性感染中，應用其治療性疫苗后，可控制感染并增強機體的天然免疫力，成為當前病毒研究的熱點。利用包膜蛋白(ENV)誘發有效的中和抗體，一直是HIV疫苗研發的重要策略。專利申請號為201010126144.3的中國專利，公開了密碼子優化的HIV-1gp120基因共有序列及gp120核酸疫苗。本發明應用多序列比對分析，獲得中國HIV-1流行病毒株(A/E重組亞型、B/C重組亞型和ThB亞型)包膜蛋白gp120共有氨基酸序列；應用人工合成的方法制備編碼共有氨基酸序列的gp120基因片段，該基因經密碼子優化，兼顧了哺乳動物細胞和大腸桿菌密碼子使用偏好；在此基礎上，構建了由gp120基因和真核表達載體pJW4303組成的HIV-1gp120核酸疫苗。該核酸疫苗可以應用于動物和人體免疫，也可以應用于gp120蛋白的表達和生產。但是，在試驗中發現，抗原表位比較難暴露，導致結合位點親和力較弱，病毒突變免疫逃逸的可能性大大增加。

因此，開發一種新抗HIV-1基因，并利用其制備成疫苗，不但具有迫切的研究價值，也具有良好的經濟效益和醫用潛力，這正是本發明得以完成的動力所在和基礎。

發明內容

為了克服上述所指出的現有技術的缺陷，本發明人對此進行了深入研究，在付出了大量創造性勞動后，從而完成了本發明。

具體而言，本發明所要解決的技術問題是：提供抗HIV-1基因、該基因的應用、具有該基因的DC疫苗及疫苗制備方法，以提高結合度。

為解決上述技術問題，本發明的技術方案是：

第一方面，本發明提供了抗HIV-1基因，該基因由GM-CSF核酸人工序列與gp120-CD4模塊串聯組成，所述gp120-CD4模塊含有以下基因片段中的至少一條；

(1)gp120(B)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列；

(2)gp120(C)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列；

(3)gp120(AE)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列；

當所述gp120-CD4模塊含有兩條或以上的基因片段時，含有的所述基因片段串聯。