[發(fā)明專利]抗HIV-1基因、該基因的應(yīng)用、具有該基因的DC疫苗及疫苗制備方法

有效

• 申請?zhí)枺?/td>: 201711239836.7
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN107955815B
• 公開（公告）日: 2019-06-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 劉明錄;王立新;馮建海;金海鋒;盧永燦;韓國英;馬洪華;萬磊;張傳鵬;強(qiáng)邦明;劉敏;韓慶梅;王亮
• 申請（專利權(quán)）人: 山東興瑞生物科技有限公司
• 主分類號: C12N15/62
• 分類號: C12N15/62;C12N15/867;A61K39/21;A61P31/18
• 代理公司: 濟(jì)南誠智商標(biāo)專利事務(wù)所有限公司 37105
• 代理人: 侯德玉

1.DC疫苗，其特征在于：包含抗HIV-1基因，所述抗HIV-1基因由GM-CSF核酸人工序列與gp120-CD4模塊串聯(lián)組成，且為以下基因序列順序串聯(lián)：

GM-CSF核酸人工序列，如SEQ ID NO.1；

gp120(B)核酸人工序列，如SEQ ID NO.2；

G4S核酸人工序列，如SEQ ID NO.5；

CD4核酸人工序列，如SEQ ID NO.6；

gp120(C)核酸人工序列，如SEQ ID NO.3；

G4S核酸人工序列，如SEQ ID NO.5；

CD4核酸人工序列，如SEQ ID NO.6；

gp120(AE)核酸人工序列，如SEQ ID NO.4；

G4S核酸人工序列，如SEQ ID NO.5；

CD4核酸人工序列，如SEQ ID NO.6。

2.如權(quán)利要求1所述的DC疫苗，其特征在于：所述抗HIV-1基因采用包括如下步驟的方法合成：

(1)分別按GM-CSF核酸人工序列、gp120(B)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列、gp120(C)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列、gp120(AE)核酸人工序列、G4S核酸人工序列、CD4核酸人工序列，合成其整個(gè)表達(dá)框并插入標(biāo)準(zhǔn)載體pUC上得到pUC-HIV-gp120-CD4；

(2)將pUC-HIV-gp120-CD4進(jìn)行雙酶切，利用瓊膠電泳將含有HIV-gp120-CD4 DNA片段瓊膠部位切下，利用DNA extraction kit溶膠液處理、過DF柱棄濾液、漂洗DF柱、空離、洗脫DF柱、收集離心物，得到純化的HIV-gp120-CD4片段，即所述抗HIV-1基因。

3.如權(quán)利要求1所述的DC疫苗在制備抑制HIV病毒藥物方面的應(yīng)用。

4.如權(quán)利要求3所述的應(yīng)用，其特征在于：在制備抑制HIV-1的B、C、CRF01_AE三種亞型中國流行株病毒藥物方面的應(yīng)用。

5.制備如權(quán)利要求1所述疫苗的方法，其特征在于：包括如下步驟：

(1)人工合成所述抗HIV-1基因的整個(gè)表達(dá)框，插入到慢病毒表達(dá)載體pLent-C-GFP，純化后獲得重組表達(dá)載體的質(zhì)粒；

(2)將步驟(1)得到的質(zhì)粒與慢病毒包裝質(zhì)粒采用磷酸鈣轉(zhuǎn)染法共轉(zhuǎn)染293T細(xì)胞，培養(yǎng)后得到g120-CD4病毒液；

(3)利用步驟(2)得到的g120-CD4病毒液感染未成熟的DC細(xì)胞，并培養(yǎng)未成熟的DC細(xì)胞至成熟，即得到表達(dá)gp120-CD4的DC疫苗。