[發明專利]基于唾液蛋白質組學的肝癌肝郁證生物標志物檢測的方法

在審

• 申請號: 201711237589.7
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN108287242A
• 公開（公告）日: 2018-07-17
• 發明（設計）人: 吳正治;丁峰;曹美群;孫珂煥;黃飛娟;范大華;姚永超
• 申請（專利權）人: 深圳市老年醫學研究所;吳正治
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 北京華智則銘知識產權代理有限公司 11573
• 代理人: 陳向敏

本發明公開了基于唾液蛋白質組學的肝癌肝郁證生物標志物檢測的方法，具體步驟如下：樣品蛋白提取；采用Brad ford法測定提取的蛋白濃度；蛋白酶解；iTRAQ標記；真空冷凍離心干燥；高pH條件下的反相色譜分離；ABI?5600進行蛋白質分析；質譜數據分析：在選擇數據庫時，若為已經測序生物，直接選用該物種數據庫，若為非測序生物，則選擇與被測樣品最為相關的大類蛋白質組數據庫；采用ABI?5600型質譜儀進行iTRAQ的質譜分析。本發明能夠快速、可靠的蛋白質組學技術方案來發現肝癌肝郁證中的特異性蛋白標記物，為肝癌肝郁證早期診治、術后復發、轉移及預后觀察建立一種無創、簡便、快捷實用的檢測評估手段。

技術領域

本發明涉及一種生物標志物檢測方法，具體是一種基于唾液蛋白質組學的肝癌肝郁證生物標志物檢測的方法。

背景技術

隨著人類基因組計劃(human genomic project，HGP)的完成，人們逐漸將研究靶向轉變對蛋白質組(proteome)的研究。蛋白質組一詞是在1994年由Williams和Wilkins提出，指基因組編碼的所有蛋白質，即某一物種、個體、器官、組織乃至細胞的全部蛋白質，強調基因組對應的所有蛋白質構成的整體。2001年，Nature和Science在公布人類基因組草圖的同時，分別發表了Abbott和Fields的評述與展望。隨之，蛋白質組學的地位提升到了前所未有的高度，被認為是功能基因組學前沿研究戰略的制高點、決勝點。蛋白質組學(proteomics)是一種新興的科學研究技術，其有別于傳統的單個基因或單個蛋白的研究模式，而是從整體水平分析機體或細胞全部蛋白質組成成分、表達、修飾、結構功能和相互作用，以及蛋白質和核酸之間的相互作用，對生命的復雜活動有全面和本質的認識，從整體層次上對蛋白質進行動態研究。

蛋白質是生命活動的執行者，是基因表達的產物，其表達、修飾、功能以及彼此相互作用均受到遺傳及環境因素的影響，于是機體出現疾病狀態必然會引起蛋白質含量或者存在形式的變化，這些變化的蛋白質分子可以為臨床疾病診斷的物質基礎提供依據。蛋白質組學主要是運用現代先進的檢測技術，檢測機體從小到一個細胞到大至整個機體的全部基因所表達的蛋白質的特性，比較分析生理或病理狀態、用藥及不用藥狀態下的差異表達蛋白質，找出不同狀態下個體表達差異的蛋白質，從而為生命的物質基礎、疾病的早期檢測與診斷等研究尋找分子診斷標志物提供依據。

近年來，隨著現代科學及生物化學的微量檢測分析技術的發展創新，唾液作為一種臨床容易采集而且操作過程完全沒有創傷性的體液逐漸進入了人們研究活動的視角，且具有無法估計的科研潛力以及臨床應用前景。首先，相比血清標本而言，唾液標本的采集更安全，具有無創性，采集過程中患者無痛苦，易于接受，而且無血源性疾病傳播的風險存在；與尿液標本相比，唾液標本具有可實時采樣、更方便的優點。此外，唾液檢測需要的樣本量小、成本低、易于儲存和運輸。最重要的是，唾液標本成分與血液、尿液等體液成分具有極高的相似性，對疾病診斷具有極強的敏感性和特異性。

唾液是人體常見的一種重要體液，其包涵大量的激素、蛋白質、酶、抗體、補體、細胞因子及各種微生物等血液成分，這些血液成分通過順濃度梯度被動的跨細胞膜轉運或逆濃度梯度的主動轉運等途徑分泌在唾液當中，且隨體內病理生理變化的影響而呈動態變化過程。研究唾液的PH值、電解質、生化指標、微生物、免疫指標、蛋白質等成分變化與疾病的關系，發現唾液成分的變化可作為疾病診斷、療效判斷、藥物監測的參考指標，在臨床疾病的診治活動中具有重要的潛在應用價值。根據目前的文獻資料顯示，唾液不僅能夠作為艾滋病、乙型肝炎等傳染性疾病、口腔惡性腫瘤及乳腺癌等惡性腫瘤的診斷標志，而且也可以應用于糖尿病、關節炎、心臟病及腎臟疾病等各個系統疾病的診斷，從而成為目前西方國家研究者熱衷的取代血清學檢查的首選標本。