[發明專利]一種無創傷胃癌唾液生物標記物的篩選方法

在審

• 申請號: 201711237539.9
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN108152508A
• 公開（公告）日: 2018-06-12
• 發明（設計）人: 吳正治;黃飛娟;范大華;姚永超;曹美群;孫珂煥;丁峰
• 申請（專利權）人: 深圳市老年醫學研究所;吳正治
• 主分類號: G01N33/68
• 分類號: G01N33/68;G01N33/574
• 代理公司: 北京華智則銘知識產權代理有限公司 11573
• 代理人: 陳向敏

本發明公開了一種無創傷胃癌唾液生物標記物的篩選方法，具體步驟包括蛋白樣品的準備、蛋白定量、蛋白酶解及冷凍干燥、iTRAQ標記樣品、C18脫鹽、液相分離及質譜鑒定和數據分析；數據分析時利用Panther Classificition System對篩選出的差異蛋白進行包括生物學進程、分子功能的以及細胞組分的GO功能富集；接著利用STRING分析軟件對差異蛋白進行蛋白相互作用分析；隨后對差異蛋白進行KEGG信號通路分析。本發明能夠快速、可靠的蛋白質組學技術方案來發現胃癌中的特異性蛋白標記物，為胃癌早期診治、術后復發、轉移及預后觀察建立一種無創、簡便、快捷實用的檢測評估手段。

技術領域

本發明涉及一種生物標記物的篩選方法，具體是一種無創傷胃癌唾液生物標記物的篩選方法。

背景技術

胃癌是全球最常見的惡性消化道腫瘤之一。胃癌起病隱匿、早期癥狀和體征均不明顯，需要依靠輔助檢查確診。目前，常規胃鏡檢查并在鏡下獲取病理組織進行活檢被公認為是胃癌診斷的金標準，但是在我國尚難以作為普查方式大規模開展。通過胃部熒光照相術對無癥狀個體執行的大量篩選項目已增加了早期胃癌病例的檢測數量，將總體5年存活率提高至超過50％。其靈敏度和特異度較佳，然而，成本效益研究指出，胃部熒光照相術在胃癌發生率較低的西方國家并不可行。另外，鋇餐造影、螺旋CT等影像學檢查，腫瘤標記物、幽門螺桿菌、單克隆抗體、基因診斷、端粒酶以及微衛星不穩定性等分子生物學指標檢查以及色素內鏡、超聲內鏡等其他輔助檢查手段的診斷率均不理想，加之在高危人群中健康宣教匱乏，致使我國早期胃癌診斷率僅為5％～15％，雖然早期胃癌治療后5年生存率可達80.2％～93.7％，但是一半以上的患者在確診時已為中晚期，常伴有淋巴轉移及遠處轉移，而文獻報道可以手術治療的進展期胃癌5年生存率僅為約10.8％～65.7％，大部分進展期胃癌已失去手術機會，。因此對胃癌患者的早期無創傷診斷于臨床有重要的積極意義。

唾液是人體不可缺少的一種重要體液，血液成分如多種激素、氨基酸、電解質、免疫球蛋白等均可通過毛細血管壁的唾液血液屏障進入唾液作為人體體液的一部分，其成分含量的變化，受體內各種病理生理變化的影響。若將唾液唾液代替血液作為診斷指標，不僅取材方便，無創傷性，可隨時進行動態觀察，且實驗結果穩定，方法靈敏度高，重復性好。同位素的相對與絕對定量(isobaric tags for relative and absolute quantitation，iTRAQ)技術是2004年美國應用公司研發的一種體外同種同位素的4種標記技術，該技術可用于篩選和尋找任何因素引起的不同種樣本間的差異表達蛋白，結合生物信息學揭示細胞生理功能，同時也可對某些關鍵蛋白進行定性和定量分析。隨后該公司為了增加檢測樣本的通量進一步推出了8個樣本的試劑盒。該技術不僅降低了實驗過程中所引入的技術誤差，還克服了2-DE不能對低豐度、極大和極小、極堿性和疏水蛋白進行有效分離的問題，使得全面分析蛋白質組的變化成為可能。因此為克服現有技術的不足，我們引入iTRAQ這種高通量蛋白質組學技術從唾液蛋白中來篩選胃癌的生物標志物以提高早期胃癌患者的發現率和診斷率是一種新的方便、快捷、無創且特異性、敏感性均高的檢測評估手段。