[發明專利]改進液體培養基的制備方法

在審

• 申請號: 201711235458.5
• 申請日: 2017-11-30
• 公開（公告）號: CN107916240A
• 公開（公告）日: 2018-04-17
• 發明（設計）人: 范楊艷;吳強;王婷婷;馬禮耕;朱濤
• 申請（專利權）人: 成都歐林生物科技股份有限公司
• 主分類號: C12N1/20
• 分類號: C12N1/20;C12R1/46
• 代理公司: 暫無信息
• 代理人: 暫無信息

技術領域

本發明涉及微生物技術領域，具體涉及改進液體培養基的制備方法。

背景技術

肺炎鏈球菌(streptococcus pneumoniae)于1881年首次由巴斯德分離出，是大葉性肺炎、腦膜炎、支氣管炎的主要致病源之一，它也能引起中耳炎、鼻竇炎和菌血癥等。肺炎鏈球菌感染是在全球范圍內引起死亡的重要原因之一。美國有資料顯示，估計每年有40～50萬人患肺炎球菌性肺炎，病死率為5％～10％。在用疫苗可預防兒童死亡的疾病中，肺炎鏈球菌引起的疾病排名第一。隨著抗菌素的大量使用，耐藥菌株與日俱增，醫學界再次關注疫苗的研發。肺炎球菌目前已發現90多種血清型。其細菌表面莢膜具有抗原性，再將肺炎球菌多糖共價連接到載體蛋白使之成為胸腺依賴性(TD)抗原，能夠對嬰幼兒和老人產生抗體，免疫效果有效提高。現有疫苗均是提取其莢膜多糖為原料制得。

自肺炎疫苗研發以來，由于其莢膜多糖產量較低，只有通過盡量擴大生產規模，以達到提高多糖產量的目的，因此生產成本較高。提高多糖產量可從篩選優質菌種、優化發酵工藝、優化純化工藝等關鍵工序著手。篩選莢膜較厚的菌種，即是關鍵工藝之一，從源頭上解決這一問題。

發明內容

本發明所要解決的技術問題是現有培養基培養肺炎鏈球菌獲得的莢膜多糖產量較低，目的在于提供改進液體培養基的制備方法，采用本發明培養基獲得莢膜較厚的菌種，利于提高莢膜多糖的產量，提高生產效率，降低生產成本。

本發明通過下述技術方案實現：

改進液體培養基的制備方法，包括以下步驟：

步驟1，稱取以下原料：

溶劑為注射用水的相對用量為1000ml：

含氮源為：胰酪胨：15～80g，胰胨：20～70g，精選大豆胨：10～80g，大豆胨：10～80g，酸水解酪蛋白：10～70g，酵母提取物：15～40g，酵母浸粉：5～40g中的任意三種組合物；

碳源為：葡萄糖：5.0～50g；

鹽類為：K₂HPO₄：0～12.0g，KCl：0～7.0g，Na₂HCO₃：0～5.0g，NaCl：3.0～10.0g， MgSO₄·7H₂O：0.4～5.0g，CaCl₂：0～0.14g；

微量元素為：L-半胱氨酸鹽酸鹽：0.12～1.80g，煙酸：0.5～1.2mg，腺嘌呤：5.5～10.5mg，FeSO₄：2.5～6.5mg；

步驟2，采用注射用水對上述原料依次進行溶解；

步驟3，將采用注射用水溶解后的混合溶液進行定容到所需體積，并調節pH值；

步驟4，除菌后獲得液體培養基。

優選地，所述步驟2中，將所述原料均加入同一容器內，然后向盛由原料混合物的容器中在不斷攪拌條件下加入注射用水；在添加完注射用水后，進行加熱溶解。

優選地，所述加熱溶解步驟為：先以1℃/min的升溫速率由25℃升溫至30℃，在30℃溫度條件下保持10min，然后以1℃/min的升溫速率由38℃升溫至35℃，在38℃溫度條件下保持5min。

優選地，所述步驟3中，采用質量濃度為10％的NaOH溶液調節pH值至7.0～7.8。

優選地，在無菌操作條件下經0.1μm的過濾減壓過濾除菌。

優選地，稱取各原料的組成為，溶劑為水的相對用量為1000ml：

含氮源為：胰酪胨：55g，胰胨：50g，精選大豆胨：50g，大豆胨：45g，酸水解酪蛋白： 45g，酵母提取物：28g，酵母浸粉：25g中的任意三種組合物；

碳源為：葡萄糖：25g；

鹽類為：K₂HPO₄：6.5g，KCl：4.5g，Na₂HCO₃：2.5g，NaCl：6.0g，MgSO₄·7H₂O：2.6g， CaCl₂：0.09g；

微量元素為：L-半胱氨酸鹽酸鹽：1.12g，煙酸：0.9mg，腺嘌呤：8.5mg，FeSO₄：4.0mg。

本發明與現有技術相比，具有如下的優點和有益效果本發明改進液體培養基的制備方法，

本發明提供了改進液體培養基的制備方法，。

具體實施方式