[發明專利]一種活性小球藻多糖的制備方法

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• 申請號: 201711223977.X
• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN107880144A
• 公開（公告）日: 2018-04-06
• 發明（設計）人: 全盈園
• 申請（專利權）人: 金華市鐵騎士生物科技有限公司
• 主分類號: C08B37/00
• 分類號: C08B37/00
• 代理公司: 北京華仲龍騰專利代理事務所(普通合伙)11548
• 代理人: 李靜

1.一種活性小球藻多糖的制備方法，包括超聲波破碎、小球藻粗多糖制備、酶解法-Sevage法除蛋白、多糖修飾，其特征在于：所述超聲波破碎步驟為：將小球藻粉和水混合均勻，再加入8-氯茶堿，超聲波破碎，離心，留下上清液，備用。

2.根據權利要求1所述的一種活性小球藻多糖的制備方法，其特征在于：所述小球藻粉和水的料液比為1:8-12，超聲波破碎功率為500-520MPa、時間為8-15min。

3.根據權利要求1所述的一種活性小球藻多糖的制備方法，其特征在于：所述8-氯茶堿為脫脂小球藻粉的重量的0.22-0.33‰。

4.根據權利要求1所述的一種活性小球藻多糖的制備方法，其特征在于：所述小球藻粗多糖制備步驟為：將超聲波破碎步驟得到的上清液的pH調至9.5-10.2，然后在溫度為65-75℃下提取3-5h，然后離心，上清液即為小球藻粗多糖溶液，備用。

5.根據權利要求1所述的一種活性小球藻多糖的制備方法，其特征在于：所述酶解法-Sevage法除蛋白步驟為：按酶添加量為220-250U/g和380-420U/g向小球藻粗多糖溶液中加入木瓜蛋白酶和堿性蛋白酶，在溫度為50-60℃、pH為7.7-8.5的條件下酶解2-3h，酶解完成后在90-100℃下滅酶20-30min，冷卻至室溫，然后置于轉速為3000-5000r/min的離心機中離心8-15min，再將上清液中以體積比1:3-5加入Sevage試劑，混合后劇烈振搖20-30min，靜置分層，分去下層變性蛋白質及交界處有機溶劑，反復2-3次，將上清液干燥得到脫蛋白多糖液。

6.根據權利要求1所述的一種活性小球藻多糖的制備方法，其特征在于：所述多糖修飾步驟為：按料液比為1:80-120將小球藻多糖溶于無水甲酰胺中，冰水浴攪拌，加入酯化試，然后在55-65℃下反應100-150min，反應完成后，恢復至室溫，調節pH至6.5-7.5，離心，收集上清液，透析，濃縮至原體積的20-30%，再加入3-5倍濃縮液體積的無水乙醇，采用邊加入邊攪拌的方式，直到沉淀完全析出為止，靜置過夜，進行沉淀多糖，離心，沉淀加水復溶，旋蒸濃縮，冷凍干燥得活性小球藻多糖。

7.根據權利要求6所述的一種活性小球藻多糖的制備方法，其特征在于：所述酯化試為重量比為1:4-6:0.002-0.003的氯磺酸、吡啶和L-丙氨酰-L-谷氨酰胺制備得到。