[發明專利]一種小分子量的絲素肽的分離方法

在審

• 申請號: 201711223637.7
• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN107722116A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 王建南;張玲;裔洪根
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/14;C07K1/16
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 常亮

技術領域

本發明涉及紡織技術領域，尤其是涉及一種小分子量的絲素蛋白的分離方法。

背景技術

家蠶蠶絲是由家蠶合成與分泌的天然動物蛋白，來源廣泛，其絲素蛋白具有良好的生物相容性，由20種人體可吸收的氨基酸組成，最終降解產物為氨基酸或小肽，易被細胞吸收或吞噬，不會引起明顯的免疫反應，國內外大量的研究表明絲素蛋白材料能夠支持多種細胞的生長，所以絲素蛋白是研發護膚品的理想原料。但作為護膚品，能否被皮膚吸收是非常重要的，這對絲蛋白分子量具有一定的要求。在本發明作出之前，對絲素蛋白特定分子量的精準分離報導極少。一些報導采用不同脫膠方法、調節絲素溶解溫度或不同溶劑等方法制備大分子量絲素蛋白、分子量可控絲素蛋白、中分子量絲素蛋白，這些方法制備的絲素蛋白事實上還是分子量分布較寬的連續分布的混合溶液。不管如何脫膠或溶解，絲素溶解液均是由小分子量到大分子量連續分布的混合溶液，沒有分離純化出真正意義上的并且較精準小分子量范圍的絲素蛋白。傳統的酸或堿溶解法可以獲得小分子量的絲素蛋白，這種方法對絲素的溶解不可控，雖然比起鹽溶解法獲得了小分子量，但是在絲纖維溶解的同時，會破壞部分氨基酸,極大地影響絲素蛋白分子的生物活性。上述這些已報導的采用溶液透析、濾膜過濾或酸堿溶解的方法獲得的絲素溶液摻雜生物提取物，用于護膚品或食品具有異味。

發明內容

有鑒于此，本發明要解決的技術問題在于提供一種小分子量的絲素肽分離方法，本發明的方法制備得到了較窄分子量范圍的多級別小分子量的絲素肽，同時親水性更好，不會影響絲素蛋白分子的生物活性。

本發明提供了一種小分子量的絲素肽的分離方法，包括：

a)將家蠶蠶絲脫膠、加入中性鹽溶液溶解，得到絲素蛋白溶解液；

b)將絲素蛋白溶解液加入平衡后的葡聚糖Sephadex G10柱中，用滅菌水洗脫絲素蛋白，收集流出液，得到脫鹽的絲素蛋白水溶液；

c)將脫鹽的絲素蛋白水溶液凍干，得到凍干后的絲素蛋白；

d)將凍干的絲素蛋白溶解液加入平衡后的葡聚糖Sephadex G50柱中，用滅菌水洗脫絲素蛋白，分管收集；

e)采用SDS-PAGE電泳或質譜篩選步驟d)收集管中1500Da以下的絲素肽，再次加入平衡后的葡聚糖Sephadex G15柱中，用滅菌水洗脫絲素肽，分管收集，分離1500Da以下的各級小分子量絲素肽。

優選的，步驟a)所述脫膠具體為采用碳酸鈉、碳酸氫鈉或生物酶進行脫膠。

優選的，步驟a)所述中性鹽溶液選自溴化鋰或氯化鈣-乙醇；所述溶解時間為5～7小時；所述絲素蛋白溶解液濃度為10～50mg/mL。

優選的，步驟c)還可以為將脫鹽的絲素蛋白水溶液倒入聚苯乙烯板內，60～100℃烘干得到絲素蛋白膜。

優選的，步驟c)所述凍干后還包括60～100℃熱風干燥3～5h。

優選的，步驟c)后還包括將凍干后的絲素蛋白浸漬于去離子水中，收集溶解有絲素蛋白的水溶液，凍干，得到再次凍干的絲素蛋白。

優選的，所述浸漬的浴比為1:10mg/mL；所述浸漬的時間為1～30min。

優選的，所述凍干的絲素蛋白溶解液的濃度為30～80mg/mL。

優選的，步驟b)所述洗脫流速為200～400mL/h；步驟d)所述洗脫流速為30～160mL/h；步驟e)所述洗脫流速為8～10mL/h。

優選的，步驟e)所述1500Da以下的絲素肽的溶解液的濃度為10～50mg/mL。