[發明專利]一種小分子量的絲素肽的分離方法

在審

• 申請號: 201711223637.7
• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN107722116A
• 公開（公告）日: 2018-02-23
• 發明（設計）人: 王建南;張玲;裔洪根
• 申請（專利權）人: 蘇州大學
• 主分類號: C07K14/435
• 分類號: C07K14/435;C07K1/14;C07K1/16
• 代理公司: 北京集佳知識產權代理有限公司11227
• 代理人: 常亮

1.一種小分子量的絲素肽的分離方法，其特征在于，包括：

a)將家蠶蠶絲脫膠、加入中性鹽溶液溶解，得到絲素蛋白溶解液；

b)將絲素蛋白溶解液加入平衡后的葡聚糖Sephadex G10柱中，用滅菌水洗脫絲素蛋白，收集流出液，得到脫鹽的絲素蛋白水溶液；

c)將脫鹽的絲素蛋白水溶液凍干，得到凍干后的絲素蛋白；

d)將凍干的絲素蛋白溶解液加入平衡后的葡聚糖Sephadex G50柱中，用滅菌水洗脫絲素蛋白，分管收集；

e)采用SDS-PAGE電泳或質譜篩選步驟d)收集管中1500Da以下的絲素肽，再次加入平衡后的葡聚糖Sephadex G15柱中，用滅菌水洗脫絲素肽，分管收集，分離得1500Da以下的各級小分子量絲素肽。

2.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟a)所述脫膠具體為采用碳酸鈉、碳酸氫鈉或生物酶進行脫膠。

3.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟a)所述中性鹽溶液選自溴化鋰或氯化鈣-乙醇；所述溶解時間為5～7小時；所述絲素蛋白溶解液濃度為10～50mg/mL。

4.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c)還可以為將脫鹽的絲素蛋白水溶液倒入聚苯乙烯板內，60～100℃烘干得到絲素蛋白膜。

5.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟c)所述凍干后還包括60～100℃熱風干燥3～5h。

6.根據權利要求5所述的方法，其特征在于，步驟c)后還包括將凍干后的絲素蛋白浸漬于去離子水中，收集溶解有絲素蛋白的水溶液，凍干，得到再次凍干的絲素蛋白。

7.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述浸漬的浴比為1:10mg/mL；所述浸漬的時間為1～30min。

8.根據權利要求6所述的方法，其特征在于，所述凍干的絲素蛋白溶解液的濃度為30～80mg/mL。

9.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟b)所述洗脫流速為200～400mL/h；步驟d)所述洗脫流速為30～160mL/h；步驟e)所述洗脫流速為8～10mL/h。

10.根據權利要求1所述的方法，其特征在于，步驟e)所述1500Da以下的絲素肽的溶解液的濃度為10～50mg/mL。