[發明專利]一種寨卡病毒的重組基因及其制備方法和應用

有效

• 申請號: 201711222741.4
• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN107988239B
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 李紅衛;劉軍;顧為望;李青青;仇珍珍;利曉欣;萬鵬飛;陳晃耀;梁文翰
• 申請（專利權）人: 南方醫科大學
• 主分類號: C12N15/40
• 分類號: C12N15/40;C12N15/867;C12N5/10
• 代理公司: 廣州市天河廬陽專利事務所(普通合伙) 44244
• 代理人: 胡濟元

1.一種寨卡病毒的重組基因，該重組基因的DNA序列如SEQ ID NO 1所示。

2.一種表達載體，該表達載體是插入有SEQ ID NO 1所示重組基因的pMD19-T載體。

3.一種重組假病毒制備方法，該方法由以下步驟組成：

(1)將權利要求2所述的表達載體和慢病毒穿梭載體VSV-G分別進行XhoI單酶切以及瓊脂糖凝膠電泳后，膠回收小片段和大片段；然后，對VSV-G酶切回收的大片段進行補平及去磷，對上述表達載體酶切回收的小片段進行補平，再將所得到的兩個片段采用NEB的T4連接酶連接，得到克隆載體pCMV-ZIKV-Env/VSV-G-TC；

(2)將所得到的克隆載體pCMV-ZIKV-Env/VSV-G-TC與含綠色熒光蛋白報告基因的慢病毒包裝核心載體pLV-eGFP和慢病毒輔助質粒psPAX2共轉染人胚胎腎細胞HEK-293T；共轉染48小時后收集培養上清，離心去細胞碎片，即得所述的重組假病毒；其中，

所述的pCMV-ZIKV-Env/VSV-G-TC、pLV-eGFP和psPAX2三者的摩爾比為pLV-eGFP︰psPAX2︰pCMV-ZIKV-Env/VSV-G-TC＝4︰3︰1；

所述的共轉染方法為常用的PEI轉染法。