[發明專利]一種檉柳組培苗繼代培養的方法

在審

• 申請號: 201711222648.3
• 申請日: 2017-11-29
• 公開（公告）號: CN108012922A
• 公開（公告）日: 2018-05-11
• 發明（設計）人: 楊慶山;周健;劉德璽;魏海霞;李永濤;王霞;王莉莉;王守國;朱文成;董玉峰
• 申請（專利權）人: 山東省林業科學研究院
• 主分類號: A01H4/00
• 分類號: A01H4/00
• 代理公司: 北京志霖恒遠知識產權代理事務所(普通合伙) 11435
• 代理人: 崔靜

本發明公開了一種檉柳組培苗繼代培養的方法，在培養過程中，植物體釋放出的醌類物質會被活性炭吸附，且在對繼代組織細胞進行繼代培養時，隨著繼代組織細胞的分裂，使得細胞之間出現接觸抑制性生長，同時，繼代培養基內部的營養不足和代謝物積累，需要定期對細胞培養基進行更換，從而能夠將培養時植物體釋放出的醌類物質一起倒掉，避免培養出的幼苗出現褐化的情況。

技術領域

本發明涉及檉柳栽繼代培養術領域，具體為一種檉柳組培苗繼代培養的方法。

背景技術

檉柳別名垂絲柳、西河柳、西湖柳、紅柳、陰柳；檉柳的嫩枝葉是中藥材，產于中國各地，鮮用或干用。檉柳枝條細柔，姿態婆娑，開花如紅蓼，頗為美觀，常被栽種為庭園觀賞植栽。可用于痘疹透發不暢或疹毒內陷、感冒、咳嗽、風濕骨痛。目前，檉柳栽培的方法包括容器育苗、枝條扦插和繼代培養等方法。

現有技術中，檉柳在進行體外組織培養時，植物體釋放出的醌類物質使植株周圍的培養基變成棕褐色，但植株本身并無褐化。這種現象在外植體誘導過程中并未出現，但在轉接入生根培養基后均會發生，產生褐化現象的組培苗仍能生長并生根，但增殖速度和生根率受到明顯影響，情況嚴重還會導致組培苗基部逐漸褐化并危及其生存。

發明內容

本發明的目的在于提供一種檉柳組培苗繼代培養的方法，以解決上述背景技術中提出的問題。

為實現上述目的，本發明提供如下技術方案：

本發明公開了一種檉柳組培苗繼代培養的方法，具體步驟如下：

(1)、枝條獲取：取用檉柳植物的新生嫩枝，并使用清水對嫩枝進行沖洗，沖洗時間為2～3小時；

(2)、枝條殺菌：將(1)中沖洗完成后的嫩枝放置在濃度為70％～75％的酒精消毒1～2分鐘，然后使用無菌水沖洗3～4次；

(3)、原代組織獲取：將嫩枝的表皮切開獲取內部的組織：

(4)、原代組織培養：將原代組織放置在盛有原代培養基的器皿內，在常溫25℃、光照的條件下進行培養，培養一段時間后，器皿內部的原代組織細胞分裂出繼代組織細胞，隨著組織細胞的分裂，使得繼代組織細胞一部分懸浮在器皿的內部，一部分在器皿內部貼壁生長；

(5)、繼代組織轉移：將器皿內部懸浮的繼代組織細胞直接轉移出，然后使用吹打法將器皿內部貼壁生長的組織細胞吹落；

(6)、繼代培養：將直接轉移出的細胞和吹落的組織細胞放置在繼代培養基內部，在常溫25℃、光照的條件下進行培養，一段時間后繼代組織細胞之間發生接觸，抑制細胞間的生長，需要更換繼代培養基，將繼代組織細胞分開培養，然后在繼代組織細胞之間發生接觸時，繼續更換繼代培養基，并將繼代組織細胞分開培養，直到繼代組織細胞生成幼苗。

作為優選，所述的步驟(4)中，所述原代培養基是以MS培養基為基礎，并在MS培養基內部添加有15～20g/L吲哚乙酸、5～8g/L赤霉酸、10～20g/L玉米素、30～40g/L蔗糖、5～8g/L瓊脂。

作為優選，所述的步驟(6)中，所述繼代培養基是以MS培養基為基礎，并在MS培養基內部添加有20g/L蔗糖、7g/L瓊脂、3g/L活性炭、10g/L玉米素、5g/L吲哚乙酸。

作為優選，所述原代培養基和繼代培養基的PH均為6.5～7。

與現有技術相比，本發明的有益效果是：

在本發明所述的檉柳組培苗繼代培養的方法中，在培養過程中，植物體釋放出的醌類物質會被活性炭吸附，且在對繼代組織細胞進行繼代培養時，隨著繼代組織細胞的分裂，使得細胞之間出現接觸抑制性生長，同時，繼代培養基內部的營養不足和代謝物積累，需要定期對細胞培養基進行更換，從而能夠將培養時植物體釋放出的醌類物質一起倒掉，避免培養出的幼苗出現褐化的情況。

附圖說明