[發(fā)明專利]一種檉柳組培苗繼代培養(yǎng)的方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711222648.3
• 申請(qǐng)日: 2017-11-29
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108012922A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-05-11
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 楊慶山;周健;劉德璽;魏海霞;李永濤;王霞;王莉莉;王守國(guó);朱文成;董玉峰
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 山東省林業(yè)科學(xué)研究院
• 主分類號(hào): A01H4/00
• 分類號(hào): A01H4/00
• 代理公司: 北京志霖恒遠(yuǎn)知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11435
• 代理人: 崔靜

1.一種檉柳組培苗繼代培養(yǎng)的方法，其特征在于：具體步驟如下：

(1)、枝條獲取：取用檉柳植物的新生嫩枝，并使用清水對(duì)嫩枝進(jìn)行沖洗，沖洗時(shí)間為2～3小時(shí)；

(2)、枝條殺菌：將(1)中沖洗完成后的嫩枝放置在濃度為70％～75％的酒精消毒1～2分鐘，然后使用無(wú)菌水沖洗3～4次；

(3)、原代組織獲取：將嫩枝的表皮切開(kāi)獲取內(nèi)部的組織：

(4)、原代組織培養(yǎng)：將原代組織放置在盛有原代培養(yǎng)基的器皿內(nèi)，在常溫25℃、光照的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，培養(yǎng)一段時(shí)間后，器皿內(nèi)部的原代組織細(xì)胞分裂出繼代組織細(xì)胞，隨著組織細(xì)胞的分裂，使得繼代組織細(xì)胞一部分懸浮在器皿的內(nèi)部，一部分在器皿內(nèi)部貼壁生長(zhǎng)；

(5)、繼代組織轉(zhuǎn)移：將器皿內(nèi)部懸浮的繼代組織細(xì)胞直接轉(zhuǎn)移出，然后使用吹打法將器皿內(nèi)部貼壁生長(zhǎng)的組織細(xì)胞吹落；

(6)、繼代培養(yǎng)：將直接轉(zhuǎn)移出的細(xì)胞和吹落的組織細(xì)胞放置在繼代培養(yǎng)基內(nèi)部，在常溫25℃、光照的條件下進(jìn)行培養(yǎng)，一段時(shí)間后繼代組織細(xì)胞之間發(fā)生接觸，抑制細(xì)胞間的生長(zhǎng)，需要更換繼代培養(yǎng)基，將繼代組織細(xì)胞分開(kāi)培養(yǎng)，然后在繼代組織細(xì)胞之間發(fā)生接觸時(shí)，繼續(xù)更換繼代培養(yǎng)基，并將繼代組織細(xì)胞分開(kāi)培養(yǎng)，直到繼代組織細(xì)胞生成幼苗。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檉柳組培苗繼代培養(yǎng)的方法，其特征在于：所述的步驟(4)中，所述原代培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，并在MS培養(yǎng)基內(nèi)部添加有15～20g/L吲哚乙酸、5～8g/L赤霉酸、10～20g/L玉米素、30～40g/L蔗糖、5～8g/L瓊脂。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種檉柳組培苗繼代培養(yǎng)的方法，其特征在于：所述的步驟(6)中，所述繼代培養(yǎng)基是以MS培養(yǎng)基為基礎(chǔ)，并在MS培養(yǎng)基內(nèi)部添加有20g/L蔗糖、7g/L瓊脂、3g/L活性炭、10g/L玉米素、5g/L吲哚乙酸。

4.根據(jù)權(quán)利要求2或3所述的一種檉柳組培苗繼代培養(yǎng)的方法，其特征在于：所述原代培養(yǎng)基和繼代培養(yǎng)基的PH均為6.5～7。