[發明專利]一種乙酰基四肽-2的制備方法

有效

• 申請號: 201711218826.5
• 申請日: 2017-11-28
• 公開（公告）號: CN107722107B
• 公開（公告）日: 2021-06-04
• 發明（設計）人: 王萬科;張忠旗;郭添;王昕;常剛;高長波;王斌;楊小琳;趙金禮
• 申請（專利權）人: 陜西慧康生物科技有限責任公司
• 主分類號: C07K5/11
• 分類號: C07K5/11;C07K1/16;C07K1/06;C07K1/04;C07K1/02
• 代理公司: 西安永生專利代理有限責任公司 61201
• 代理人: 高雪霞

1.一種乙酰基四肽-2的制備方法，其特征在于該方法由下述步驟組成：

(1)合成Fmoc-L-m-Tyr(TBDMS)-OH

①合成Fmoc-L-m-Tyr-OH

以水和乙腈的混合液為溶劑，將L-m-Tyr-OH、芴甲氧羰酰琥珀酰亞胺、三乙胺在室溫下進行反應，反應完后用鹽酸調節pH5，濃縮除去乙腈，用硫酸氫鉀水溶液和乙酸乙酯萃取，對乙酸乙酯相進行濃縮，濃縮液用石油醚結晶并淋洗過濾，得到Fmoc-L-m-Tyr-OH；

②合成Fmoc-L-m-Tyr(TBDMS)-OH

以乙腈為溶劑，將Fmoc-L-m-Tyr-OH、叔丁基二甲基氯硅烷、N,N-二異丙基乙胺在室溫下進行反應，反應完成后用硫酸氫鉀水溶液調節pH5，濃縮除去乙腈，用硫酸氫鉀水溶液和用乙酸乙酯萃取，對乙酸乙酯相進行濃縮，濃縮物柱層析純化，得到Fmoc-L-m-Tyr(TBDMS)-OH；

(2)合成Fmoc-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin

以N,N-二甲基甲酰胺為溶劑，將Rink Amid-AM Resin、Fmoc-L-m-Tyr(TBDMS)-OH、1-羥基苯并三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺在室溫下進行反應，得到Fmoc-L-m-Tyr(TBDMS)-RinkAmide-AM Resin；

(3)合成Fmoc-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin

將步驟(2)得到的Fmoc-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin用哌啶的N,N-二甲基甲酰胺溶液脫除Fmoc保護基，得到H₂N-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin；以N,N-二甲基甲酰胺為溶劑，將H₂N-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin、Fmoc-Val-OH、1-羥基苯并三唑、N,N-二異丙基碳二亞胺在室溫下進行反應，得到Fmoc-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin；

(4)合成Fmoc-D-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin

按照步驟(2)的方法在步驟(3)得到的Fmoc-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AMResin上連接Fmoc-Asp(OtBu)-OH，得到Fmoc-Asp(OtBu)-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-RinkAmide-AM Resin；然后按照步驟(3)的方法在得到的Fmoc-Asp(OtBu)-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin上連接Fmoc-D-Lys(Boc)-OH，得到Fmoc-D-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin；

(5)合成Ac-D-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin

將步驟(4)得到的Fmoc-D-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AMResin用哌啶的N,N-二甲基甲酰胺溶液脫除Fmoc保護基，得到H₂N-D-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin；然后將H₂N-D-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin中加入二氯甲烷與乙酸酐、N,N-二異丙基乙胺的混合液，在室溫下進行反應，得到Ac-D-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-RinkAmide-AM Resin；

(6)制備乙酰基四肽-2

將Ac-D-Lys(Boc)-Asp(OtBu)-Val-L-m-Tyr(TBDMS)-Rink Amide-AM Resin用四丁基氟化胺的N,N-二甲基甲酰胺溶液脫除TBDMS保護基，然后用切割液脫除Boc和OtBu保護基，過濾，將濾液加入冷的甲基叔丁基醚中析出乙酰基四肽-2粗品，粗品經高效液相色譜純化、減壓濃縮、冷凍干燥，得到純度大于95％的乙酰基四肽-2產品。