[發(fā)明專利]一種測(cè)定性激素結(jié)合蛋白含量的試劑盒及其測(cè)試方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711217126.4
• 申請(qǐng)日: 2017-11-28
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN108226515A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-06-29
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 丁建華;劉振世;沈怡;張譽(yù)嚴(yán)
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 泰州澤成生物技術(shù)有限公司
• 主分類(lèi)號(hào): G01N33/68
• 分類(lèi)號(hào): G01N33/68;G01N33/543;G01N21/76
• 代理公司: 北京聯(lián)瑞聯(lián)豐知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所(普通合伙) 11411
• 代理人: 黃冠華

1.一種測(cè)定性激素結(jié)合蛋白含量的試劑盒，其特征在于，包括校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、抗試劑、磁微粒試劑、發(fā)光底物；

所述磁微粒試劑是將抗異硫氰酸熒光素抗體與羧基磁珠偶聯(lián)制成，所述發(fā)光底物是將ALPS溶解于發(fā)光底物緩沖液中制成；

分別配制校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、抗試劑、磁微粒試劑、發(fā)光底物；將校準(zhǔn)品、質(zhì)控品、抗試劑、磁微粒試劑、發(fā)光底物，獨(dú)立地置于包裝容器內(nèi)，得到性激素結(jié)合蛋白的定量測(cè)定試劑盒；

(一)、所述校準(zhǔn)品、質(zhì)控品的配制，包括以下步驟：

用校準(zhǔn)品緩沖溶液溶解性激素結(jié)合蛋白抗原，配制抗試劑的校準(zhǔn)品和質(zhì)控品；其中，所述校準(zhǔn)品緩沖溶液是通過(guò)在1L的新生牛血清中加入0.01g～0.05g的四環(huán)素和0.1g～0.5g的硫酸新霉素，完全溶解后經(jīng)過(guò)0.22μm濾膜處理制備而成；

(二)、所述抗試劑的配制：

1)抗試劑緩沖液的制備：將10g～20g的Na₂PO₃H·12H₂O、1～2g的NaPO₃H₂·12H₂O、1g～5g的綿羊血清、3g～10g的新生牛血清、1g～5g的馬血清加入1L純化水中，充分?jǐn)嚢柚镣耆芙?，?M HCl調(diào)節(jié)pH至5～6，制得所述抗試劑緩沖液；

2)異硫氰酸熒光素與性激素結(jié)合蛋白抗體偶聯(lián)，獲得異硫氰酸熒光素標(biāo)記的性激素結(jié)合蛋白包被抗體：

首先用緩沖液將異硫氰酸熒光素配制成濃度為1.0～5.0mg/mL的異硫氰酸熒光素溶液，然后按照性激素結(jié)合蛋白抗體：異硫氰酸熒光素溶液＝1:1.1～1:1.5的質(zhì)量比將二者轉(zhuǎn)移到棕色玻璃瓶里，充分混勻；充分反應(yīng)后使用pH為8～9的碳酸鹽緩沖液平衡，然后使用凝膠層析分離純化得到異硫氰酸熒光素標(biāo)記的性激素結(jié)合蛋白包被抗體；

3)堿性磷酸酶與性激素結(jié)合蛋白抗體偶聯(lián)，獲得堿性磷酸酶標(biāo)記的性激素結(jié)合蛋白抗體：

首先用緩沖液將堿性磷酸酶配制成濃度為1.0～5.0mg/mL的堿性磷酸酶溶液，性激素結(jié)合蛋白抗體和堿性磷酸酶分別將反應(yīng)基團(tuán)分別活化后按照摩爾比為堿性磷酸酶：性激素結(jié)合蛋白＝1:1～1:3的反應(yīng)比在催化劑的催化下充分混勻進(jìn)行偶聯(lián)反應(yīng)，充分反應(yīng)后，使用pH為8～9的tris緩沖液平衡，凝膠柱進(jìn)行不同分子大小片度的分離純化，得到堿性磷酸酶標(biāo)記的性激素結(jié)合蛋白標(biāo)記抗體；

將步驟2)中獲得的異硫氰酸熒光素標(biāo)記的性激素結(jié)合蛋白包被抗體和步驟3)中獲得的堿性磷酸酶標(biāo)記的性激素結(jié)合蛋白標(biāo)記抗體加入含有表面活性劑的磷酸鹽緩沖液中，充分?jǐn)嚢韬螳@得所述抗試劑。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的測(cè)定性激素結(jié)合蛋白含量的試劑盒，其特征在于，該試劑盒還包括清洗液，所述清洗液的配置方法將將160gNaCl、4gKCl、24.2g三羥甲基氨基甲烷、1mL吐溫20溶于900ml雙蒸水中，用HCL調(diào)整至PH7.4，用雙蒸水定容至1000ml。

3.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的測(cè)定性激素結(jié)合蛋白含量的試劑盒，其特征在于，所述步驟3)中的表面活性劑為T(mén)ween 20、Triton X-100、Bronidox中的一種或多種，表面活性劑的添加量為0.01％～0.5％。

4.根據(jù)權(quán)利要求1或2任一項(xiàng)所述的測(cè)定性激素結(jié)合蛋白含量的試劑盒，其特征在于所述磁微粒試劑是按照以下步驟制備的：

1)將充分混勻后的羧基磁珠濃縮液放入反應(yīng)瓶中，將該反應(yīng)瓶在磁場(chǎng)內(nèi)放置15～20min，待羧基磁珠全部沉降后吸去上清，向反應(yīng)瓶中加入相當(dāng)于反應(yīng)瓶中羧基磁珠體積2～5倍的磁微粒緩沖液，震蕩清洗20～30min；再將反應(yīng)瓶置于磁場(chǎng)中15～20min后吸去上清；重復(fù)清洗羧基磁珠3遍；最后將羧基磁珠溶液定容到10～50mg/mL，混勻待用；

2)連接反應(yīng)：按照質(zhì)量比羧基磁珠溶液：抗異硫氰酸熒光素抗體＝100:1的比例在步驟1)所制得的羧基磁珠溶液中加入抗異硫氰酸熒光素抗體，在2～8℃內(nèi)保持混勻狀態(tài)反應(yīng)18小時(shí)；

3)反應(yīng)瓶在磁場(chǎng)中放置15min，待羧基磁珠沉降后用磁微粒緩沖液洗3遍，隨后定容至10mg/mL，2～8℃保存，制得所需待用磁微粒試劑。