[發(fā)明專利]柑橘天然抑菌蛋白CsLTP3制備及其應用有效
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711211436.5 | 申請日： | 2017-11-28 |
| 公開（公告）號： | CN109837284B | 公開（公告）日： | 2022-10-04 |
| 發(fā)明（設計）人： | 鄧秀新;馬兆成;程運江;吳金龍 | 申請（專利權(quán)）人： | 華中農(nóng)業(yè)大學 |
| 主分類號： | C12N15/29 | 分類號： | C12N15/29;C12N15/11;C07K14/415;C12N15/70;C12P21/02;C07K1/14;G01N33/68;A23B7/154;C12Q1/18;C12R1/80 |
| 代理公司： | 武漢東喻專利代理事務所(普通合伙) 42224 | 代理人： | 紀元 |
| 地址： | 430070 湖*** | 國省代碼： | 湖北;42 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 柑橘 天然 蛋白 csltp3 制備 及其 應用 | ||
1.一種密碼子優(yōu)化的蕓香科植物中非特異性脂轉(zhuǎn)移蛋白CsLTP3基因在防治蕓香科植物果實采后綠霉病中的應用，其特征在于，所述基因的核苷酸序列如SEQ ID NO:2所示。
2.一種誘導表達rCsLTP3重組蛋白的方法在防治蕓香科植物果實采后綠霉病中的應用，其特征在于，所述方法包括以下步驟：將重組菌在對數(shù)生長期時加入終濃度為0.01～1mmol/L IPTG，在12～37℃誘導4～24h后，即誘導生成rCsLTP3重組蛋白；
其中，所述重組菌為轉(zhuǎn)入CsLTP3基因原核表達載體的大腸桿菌；所述CsLTP3基因原核表達載體具體是以如權(quán)利要求1所述密碼子優(yōu)化的蕓香科植物中非特異性脂轉(zhuǎn)移蛋白CsLTP3基因為模板，并經(jīng)PCR反應構(gòu)建得到的。
3.如權(quán)利要求2所述誘導表達rCsLTP3重組蛋白的方法在防治蕓香科植物果實采后綠霉病中的應用，其特征在于，是將重組菌在對數(shù)生長期時加入終濃度為0.1mmol/L IPTG，在20℃誘導16h后，即誘導生成rCsLTP3重組蛋白。
4.如權(quán)利要求2所述誘導表達rCsLTP3重組蛋白的方法在防治蕓香科植物果實采后綠霉病中的應用，其特征在于，生成的所述rCsLTP3重組蛋白還經(jīng)過純化處理，所述純化處理具體是先收集誘導后的重組菌，然后對這些重組菌進行PBS洗滌、離心、重懸于冰預冷的裂解緩沖液、以及超聲破菌處理，然后離心收集上清，接著用濾膜過濾該上清，得到的濾液經(jīng)HIS鎳柱純化體系純化洗脫處理后收集洗脫液即得到rCsLTP3重組蛋白。
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