[發(fā)明專利]接頭封閉序列、文庫構(gòu)建試劑盒及測序文庫的構(gòu)建方法

在審

• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711209208.4
• 申請(qǐng)日: 2017-11-27
• 公開（公告）號(hào): CN108456713A
• 公開（公告）日: 2018-08-28
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 李萍;梁永;單光宇;高連菊;臧晚春
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 天津諾禾致源生物信息科技有限公司
• 主分類號(hào): C12Q1/6806
• 分類號(hào): C12Q1/6806;C40B50/06;C12N15/11
• 代理公司: 北京康信知識(shí)產(chǎn)權(quán)代理有限責(zé)任公司 11240
• 代理人: 韓建偉;謝湘寧

1.一種接頭封閉序列，其特征在于，所述接頭封閉序列包括：P5接頭封閉序列，所述P5接頭封閉序列具有SEQ ID NO:1所示序列：AATGATACGGCGACCACCGAGATCTACACTCTTTCCCTACACGACGCTCTTCCGATC，且所述SEQ ID NO:1所示序列的3’末端存在反向dT修飾、間壁修飾、雙脫氧胞苷酸修飾及磷酸化修飾中的任一種。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的接頭封閉序列，其特征在于，所述接頭封閉序列還包括：P7接頭封閉序列，所述P7接頭封閉序列具有SEQ ID NO:2所示序列：CAAGCAGAAGACGGCATACGAGATNGTGACTGGAGTTCAGACGTGTGCTCTTCCGATC，其中N代表index的反向互補(bǔ)序列，且所述SEQ ID NO:2所示序列的3’末端存在反向dT修飾、間壁修飾、雙脫氧胞苷酸修飾及磷酸化修飾中的任一種。

3.一種文庫構(gòu)建試劑盒，包括接頭封閉劑，其特征在于，所述接頭封閉劑中含有權(quán)利要求1或2所述的接頭封閉序列。

4.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述接頭封閉試劑中，所述接頭封閉序列的工作濃度為0.1.～0.25nM。

5.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括插入片段中重復(fù)序列封閉劑；優(yōu)選所述插入片段中重復(fù)序列封閉劑為Cot-1 DNA。

6.根據(jù)權(quán)利要求3所述的試劑盒，其特征在于，所述試劑盒還包括雜交捕獲試劑。

7.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述雜交捕獲試劑為DNA雜交捕獲試劑，優(yōu)選所述DNA雜交捕獲試劑為IDT公司的DNA雜交捕獲試劑。

8.根據(jù)權(quán)利要求6所述的試劑盒，其特征在于，所述雜交捕獲試劑為RNA雜交捕獲試劑，優(yōu)選所述RNA雜交捕獲試劑為Agilent公司的RNA雜交捕獲試劑。

9.一種測序文庫的構(gòu)建方法，所述構(gòu)建方法包括預(yù)擴(kuò)增文庫的構(gòu)建、接頭封閉、液相雜交捕獲以及捕獲文庫擴(kuò)增的步驟，其特征在于，所述接頭封閉的步驟中采用權(quán)利要求1或2所述的接頭封閉序列進(jìn)行封閉，或者采用權(quán)利要求3至9中任一項(xiàng)所述的試劑盒中的封閉試劑進(jìn)行封閉。