[發(fā)明專利]一種用CAPN3基因進行柴達木福牛標記輔助選擇的方法在審
| 申請?zhí)枺?/td> | 201711207544.5 | 申請日： | 2017-11-27 |
| 公開（公告）號： | CN108048527A | 公開（公告）日： | 2018-05-18 |
| 發(fā)明（設(shè)計）人： | 萬君興;華子昂;孫寧;竹添;劉松潔;王嬌;薛志杰 | 申請（專利權(quán)）人： | 華子昂 |
| 主分類號： | C12Q1/6806 | 分類號： | C12Q1/6806;C12Q1/6869;C12Q1/6888;G06F19/24 |
| 代理公司： | 銀川長征知識產(chǎn)權(quán)代理事務(wù)所 64102 | 代理人： | 陳曉慶 |
| 地址： | 116000 遼寧省大連市大*** | 國省代碼： | 遼寧;21 |
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| 摘要： | |||
| 搜索關(guān)鍵詞： | 一種 capn3 基因 進行 柴達木 標記 輔助 選擇 方法 | ||
本發(fā)明公開一種用CAPN3基因進行柴達木福牛標記輔助選擇的方法，該方法是以柴達木福牛的全基因組DNA為模板，利用CAPN3基因標記進行PCR擴增獲得PCR擴增產(chǎn)物，將獲得的PCR擴增產(chǎn)物進行測序，最后對所檢測到的基因進行分型和對比分析，即針對CAPN3基因5‘UTR的C2546T位點進行PCR擴增及測序，最后對所檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析。通過本發(fā)明的方法，在柴達木福牛CAPN3基因5‘UTR中的CC、CT、TT三種基因型中，CT基因型的剪切力、活體重、胴體重與CC和TT的剪切力、活體重、胴體重個體差異顯著。因此，在柴達木福牛的繁育體系設(shè)計上通過考慮SNP位點的效應(yīng)，即可實現(xiàn)對柴達木福牛的肉質(zhì)性狀的改良，進一步提高柴達木福牛的生產(chǎn)效益。
技術(shù)領(lǐng)域：
本發(fā)明涉及一種肉牛選育的標記輔助選擇方法，特別涉及一種用CAPN3基因進行柴達木福牛標記輔助選擇的方法。
背景技術(shù)：
柴達木福牛依托青海高原上的海西州長期開展生態(tài)畜牧業(yè)的豐厚積淀，以雪域牦牛為母本、黃牛為父本生產(chǎn)犏牛、母犏牛再以安格斯牛等優(yōu)良肉牛為終端父本，應(yīng)用牦牛遠緣種間雜交技術(shù)生產(chǎn)的商品肉牛。因此，柴達木福牛既具有牦牛適應(yīng)高寒氣候、耐粗飼、抗病能力強的生物學(xué)特點，又具有初生重大、生長發(fā)育快、飼料回報高、產(chǎn)肉量高的基因稟賦，且具有營養(yǎng)豐富、低脂肪、高熱量的優(yōu)質(zhì)牛肉品質(zhì)。
在國際評價A級標準上，我們國家的牛肉一般都在3A以下，而青海的柴達木福牛通過農(nóng)業(yè)部諸位專家的鑒定，可以達到6A的標準，這對中國高檔牛肉來說填補了一個空白在高檔商品牛肉領(lǐng)域里，中國是一個后起的國家。我們國家的牛都是以耕種為主，沒有肉食品種牛。肉質(zhì)是柴達木福牛最重要的性狀之一，因此，如何針對肉質(zhì)性狀對柴達木福牛進行分子育種，將是柴達木福牛研究的核心熱點之一。
肉的嫩度主要決定于肌纖維、肌節(jié)長度、肌內(nèi)脂肪和結(jié)締組織等。鈣蛋白酶系統(tǒng)在細胞內(nèi)參與機體生長與代謝過程，還在肌原纖維更新和宰后嫩化中扮演重要角色。鈣蛋白酶(calpain)表達減少以及鈣蛋白酶抑制蛋白(calpastatin)表達量的增加，都會導(dǎo)致肌肉蛋白水解率及宰后肉嫩度的下降，這表明鈣蛋白酶水解作用是導(dǎo)致肉嫩化的主要因素。其中CAPN3只在骨骼肌表達，其mRNA表達量為經(jīng)典鈣蛋白酶的10倍。
當(dāng)前柴達木福牛存在的幾個核心問題是：一是數(shù)量較少，總數(shù)僅為2-3萬頭；其次優(yōu)良性狀需要鞏固，這些目的的實現(xiàn)都依賴于分子標記技術(shù)，因此，亟需建立一種分子標記輔助選擇技術(shù)，從而為柴達木福牛的肉用性狀改良奠定遺傳學(xué)基礎(chǔ)。
發(fā)明內(nèi)容：
本發(fā)明的目的旨在提供一種用CAPN3基因進行柴達木福牛標記輔助選擇的方法，實現(xiàn)對柴達木福牛的肉質(zhì)性狀進行改良。
為達到上述目的，本發(fā)明采取以下技術(shù)方案：
一種用CAPN3基因進行柴達木福牛標記輔助選擇的方法，是以柴達木福牛的全基因組DNA為模板，利用CAPN3基因標記進行PCR擴增獲得PCR擴增產(chǎn)物，將獲得的PCR擴增產(chǎn)物進行測序，最后對所檢測到的基因進行分型和對比分析，即針對CAPN3基因5‘UTR的C2546T位點進行PCR擴增及測序，最后對所檢測結(jié)果進行統(tǒng)計分析。
具體包括如下步驟：
1)采集柴達木福牛靜脈血進行全基因組DNA提取，然后利用瓊脂糖電泳及ND2000進行質(zhì)量、濃度和純度的檢測；
2)以提取的全基因組DNA為模板，對CAPN3基因5‘UTR區(qū)進行PCR擴增，獲得PCR擴增產(chǎn)物；其中：
引物序列為：CATCAACAGCTACGAGATGCG(上游引物)，GGTCATATAGTAAGGTCAGT(下游引物)；
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