[發明專利]高效去除核糖體RNA的構建轉錄組測序文庫的方法及試劑盒

有效

• 申請號: 201711206697.8
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN107893260B
• 公開（公告）日: 2021-01-12
• 發明（設計）人: 張必良
• 申請（專利權）人: 廣州市銳博生物科技有限公司;廣州銳康醫學檢驗所有限公司
• 主分類號: C40B50/06
• 分類號: C40B50/06
• 代理公司: 廣州華進聯合專利商標代理有限公司 44224
• 代理人: 侯武嬌

1.一種構建轉錄組測序文庫的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1)提取細胞總RNA，進行cDNA文庫構建,得到包括含有待去除的rRNA序列信息的cDNA文庫；

2)針對待去除的rRNA的cDNA文庫設計得到Crispr RNA pool；Crispr RNA pool是sgRNA pool，所述sgRNA包括如SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.133所示的序列或SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.133中的所有序列號為奇數的序列；

3)使cDNA文庫與Crispr RNA pool、Crispr蛋白接觸，通過Crispr系統編輯，得到去除了rRNA信息的cDNA文庫；

4)對步驟3)獲得的cDNA文庫進行擴增。

2.根據權利要求1所述的構建轉錄組測序文庫的方法，其特征在于，以1-100ng起始量的細胞的RNA，進行cDNA文庫構建。

3.根據權利要求2所述的構建轉錄組測序文庫的方法，其特征在于，以1-10ng起始量的細胞的RNA，進行cDNA文庫構建。

4.根據權利要求1-2任一項所述的構建轉錄組測序文庫的方法，其特征在于，包括如下步驟：

步驟3)包括：配制去rRNA反應體系，進行反應，37℃溫育反應0.5-2h。

5.根據權利要求4所述的構建轉錄組測序文庫的方法，其特征在于，37℃溫育反應1h。

6.根據權利要求4所述的構建轉錄組測序文庫的方法，其特征在于，所述Crispr蛋白為Cas9，所述Cas9的終濃度為30nM-3μM。

7.根據權利要求6所述的構建轉錄組測序文庫的方法，其特征在于，所述Cas9的終濃度為300nM。

8.根據權利要求6所述的構建轉錄組測序文庫的方法，其特征在于，在反應體系中，所述Crispr RNA pool的終濃度為2.5-3.5μM。

9.根據權利要求8所述的構建轉錄組測序文庫的方法，其特征在于，在反應體系中，所述Crispr RNA pool的終濃度為3μM。

10.一種構建轉錄組測序文庫的試劑盒，其特征在于，包括如SEQ ID NO.1-SEQ IDNO.133的sgRNA或SEQ ID NO.1-SEQ ID NO.133中的所有序列號為奇數的序列。