[發明專利]一種用PPARγ基因評定牛肌內脂肪中甘油三酯含量的方法

有效

• 申請號: 201711205050.3
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN108048535B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 華子昂;萬君興;孫寧;竹添;劉松潔;王翠芳;王嬌
• 申請（專利權）人: 華子昂
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12Q1/6888
• 代理公司: 銀川長征知識產權代理事務所 64102
• 代理人: 馬長增

本發明公開一種用PPARγ基因評定牛肌內脂肪中的甘油三酯含量的方法，該方法是通過監測牛PPARγ基因的表達量，根據牛PPARγ基因表達量與肌內脂肪中甘油三酯含量成正相關的特征，利用熒光定量實時PCR技術牛監測PPARγ基因的表達量，從而實現對牛肉肌內脂肪中甘油三酯含量的檢測。利用本發明的方法來評定牛肌內脂肪中的甘油三酯，不僅不影響牛的正常生長，而且快速準確，操作方便，養殖者可以根據檢測結果針對性的對飼料配方、環境因素或管理方法進行改善，從而實現對牛肉品質的有效控制。

技術領域：

本發明屬于分子營養學技術領域，具體是一種用PPARγ基因評定牛肌內脂肪中甘油三酯含量的方法。

背景技術：

牛肉具有高蛋白、低脂肪、低膽固醇等特點，營養豐富，一直是世界肉業發達國家、肉類消費的首選，而我國的牛肉消費量也在逐年上升。影響牛肉品質的一個核心因素就是肌內脂肪，肌內脂肪的主要成分為甘油三酯，為保障牛肉的適口性，牛肉的肌內脂肪一般要求不低于3％，飼料的配方、環境因子以及管理方法都會對牛的肌內脂肪沉積產生影響。如何能夠在養牛生產中實現對牛肉內甘油三酯的動態監測，從而及時的調整飼料配方、環境因素和管理方法被視為現代養牛業中急需解決的一種技術。

過氧化物酶體增殖物激活受體γ(peroxisome proliferations actiratedreceptor γ,PPARγ)基因屬于核受體超家族成員基因之一，在脂肪沉積和脂肪細胞分化中行使著重要的作用。眾多不同調控信號通路的研究結果表明：PPARγ基因在成年機體組織中廣泛表達，但主要在脂肪組織中表達，PPARγ基因在誘導脂肪細胞分化的同時能夠顯著提高相關脂肪因子的表達量，如：LPL、PLIN1、GATA1、CEBPA、FABPA、FAS等等，因此，PPARγ基因在脂肪細胞分化過程中的表達對于啟動和維持脂肪沉積起著重要作用。鑒于此，提供一種用PPARγ基因來監測和評定牛肌內脂肪中甘油三酯含量的方法。

發明內容：

本發明的目的旨在提供一種快速準確、操作方便用PPARγ基因評定牛肌內脂肪中甘油三酯含量的方法。

為實現上述目的，本發明采取以下技術方案：

本發明的方法是通過監測牛PPARγ基因的表達量，根據牛PPARγ基因的表達量與肌內脂肪中甘油三酯含量成正相關的特征，通過熒光定量實時PCR技術度量牛肉中甘油三酯的含量，從而實現牛肉肌內脂肪中甘油三酯的檢測。

具體包括如下步驟：

1)從被檢測的牛肉組織中提取總RNA，再通過反轉錄反應制備cDNA樣品；反轉錄反應按照TaKaRa反轉錄試劑盒標準流程進行；

2)將制備的cDNA樣品進行熒光定量實時PCR檢測，反應條件采用兩步法PCR擴增標準程序；

反應體系為：SYBR 10ul，Dye0.4ul，上下游引物各0.25ul，cDNA模版1ul，ddH2O8.1ul，總體積為20；

反應條件采用兩步法PCR擴增標準程序：預變性95℃4min，95℃ 5s，61℃ 15s，72℃ 30s，共35個循環；

采用甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)作為內參基因，其退火溫度為61℃，內參基因與目的基因的擴增程序一致。

3)在ABI7500定量PCR儀上進行檢測，熒光信號在每個循環結束時檢測，每個樣品3個重復，得到牛PPARγ基因的原始表達量；

4)將牛PPARγ基因的原始表達量經反正弦轉換后，采用Statistics軟件對實驗數據和其他數據進行t檢驗，通過數據分析即檢測到牛肉肌內脂肪中甘油三酯的含量。

上述定量PCR引物序列為：CCTGTTCCGTGCTGTGAT(上游引物)；AAAGGCATGGGAGTGGTC(下游序列)。