[發明專利]一種用PPARγ基因評定牛肌內脂肪中甘油三酯含量的方法

有效

• 申請號: 201711205050.3
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN108048535B
• 公開（公告）日: 2021-07-13
• 發明（設計）人: 華子昂;萬君興;孫寧;竹添;劉松潔;王翠芳;王嬌
• 申請（專利權）人: 華子昂
• 主分類號: C12Q1/6851
• 分類號: C12Q1/6851;C12Q1/6888
• 代理公司: 銀川長征知識產權代理事務所 64102
• 代理人: 馬長增

1.一種用PPARγ基因評定牛肌內脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：所述方法是通過監測牛PPARγ基因的表達量，根據牛PPARγ基因的表達量與肌內脂肪中甘油三酯含量成正相關的特征，通過熒光定量實時PCR技術度量牛肉中甘油三酯的含量，從而實現牛肉肌內脂肪中甘油三酯的檢測；

該方法包括如下步驟：

1)從被檢測的牛肉組織中提取總RNA，再通過反轉錄反應制備cDNA樣品；

2)將制備的cDNA樣品進行熒光定量實時PCR檢測，反應條件采用兩步法PCR擴增標準程序；

3)在ABI7500定量PCR儀上進行檢測，熒光信號在每個循環結束時檢測，得到牛PPARγ基因的原始表達量；

4)將牛PPARγ基因的原始表達量經反正弦轉換后，采用Statistics軟件對實驗數據和其他數據進行t檢驗，通過數據分析即檢測到牛肉肌內脂肪中甘油三酯的含量。

2.根據權利要求1所述的用PPARγ基因評定牛肌內脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：步驟1)中所述反轉錄反應采用TaKaRa反轉錄試劑盒標準流程進行。

3.根據權利要求1所述的用PPARγ基因評定牛肌內脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：步驟2)中所述熒光定量實時PCR檢測過程的反應體系為：SYBR10ul，Dye0.4ul，上下游引物各0.25ul，cDNA模版1ul，ddH2O8.1ul。

4.根據權利要求3所述的用PPARγ基因評定牛肌內脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：所述上游引物的序列為：CCTGTTCCGTGCTGTGAT；所述下游引物的序列為：AAAGGCATGGGAGTGGTC。

5.根據權利要求1所述的用PPARγ基因評定牛肌內脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：步驟2)中所述反應條件為預變性95℃4min，95℃5s，61℃15s，72℃30s，共35個循環。

6.根據權利要求1所述的用PPARγ基因評定牛肌內脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：步驟2)中所述熒光定量實時PCR檢測過程采用甘油醛-3-磷酸脫氫酶(GAPDH)作為內參基因，其與目的基因的擴增程序一致，退火溫度為61℃。

7.根據權利要求1-6中任一權利要求所述的用PPARγ基因評定牛肌內脂肪中甘油三酯含量的方法，其特征在于：評定牛肌內脂肪中的甘油三酯含量的基因還包括PPARα、 PPARβ、HMGCS2、APOA1、APOA2、APOC3、ME1、SCD1、SCD5、CYP7A1、NR1H3、CYP8B1、CYP27A1、 CYP8B1、DBI、FABP1、FABP3、SLC27A1、SLC27A4、CD36、LPL、OLR1、ACSL3、ACSL6、ACSL5、 ACSBG1、ACSBG2、ACSL4A、ACSL1、EHHADH、CYP4A22、ACAA1、SCP2、ACOX3、ACOX1、ACOX2、CPT1A、 CPT1B、CPT1C、CPT2、ACADL、ACADM、ANGPTL4、FABP4、SORBS1、PLIN2、PLIN4、PLIN1、PLIN5、 APIPOQ、MMP1、FAS。

8.如權利要求1-6中任一權利要求所述的PPARγ基因在牛肌內脂肪中甘油三酯的動態監測的應用。