[發(fā)明專利]一種高靈敏液晶型非標(biāo)記免疫傳感器檢測(cè)人類β防御素?2的方法

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• 申請(qǐng)?zhí)枺?/td>: 201711204563.2
• 申請(qǐng)日: 2017-11-27
• 公開(kāi)（公告）號(hào): CN107918010A
• 公開(kāi)（公告）日: 2018-04-17
• 發(fā)明（設(shè)計(jì)）人: 蘇秀霞;霍文靜;張婧;張姣;徐佳;張蓉;賀生卓;張海寧
• 申請(qǐng)（專利權(quán)）人: 陜西科技大學(xué)
• 主分類號(hào): G01N33/531
• 分類號(hào): G01N33/531
• 代理公司: 西安西達(dá)專利代理有限責(zé)任公司61202
• 代理人: 劉華

1.一種高靈敏液晶型非標(biāo)記免疫傳感器檢測(cè) HBD-2 的方法，其特征在于，包括以下步驟：

1）玻片的預(yù)處理

切割玻片至所需大小，用新配制的 Piranha 溶液于 80 ℃ 充分浸泡，然后用超純水清洗，再在無(wú)水乙醇中充分浸泡，經(jīng) N₂ 吹干，充分干燥，防塵備用；

2）玻片的組裝

2-1）上玻片用 DMOAP 溶液組裝：將步驟1）預(yù)處理的玻片浸于DMOAP 水溶液中，在常溫下充分浸泡，用超純水沖洗， N₂ 吹干，充分干燥，防塵備用；

2-2）下玻片用 APTES 和 DMOAP 混合溶液組裝：將步驟1）預(yù)處理的玻片浸入 APTES : DMOAP 質(zhì)量比為 3-5 : 1 的乙醇溶液中，于 80℃ 充分浸泡，先用無(wú)水乙醇清洗，再用超純水清洗，N₂ 吹干，充分干燥，防塵備用；

3）HBD-2 抗體的固定

將步驟2-2）氨基化處理的下玻片用戊二醛溶液于常溫下充分浸泡，用超純水洗凈，得到經(jīng)醛基化修飾的下玻片；將一定濃度的 HBD-2抗體溶液加在經(jīng)醛基化修飾的下玻片上，吹開(kāi)，于 37 ℃ 溫育 2 h，用緩沖液沖洗，再用超純水洗凈， N₂ 吹干備用， HBD-2 抗體即可通過(guò)戊二醛的偶聯(lián)作用固定在玻片上；

4）HBD-2抗原抗體特異性反應(yīng)

將一定濃度的 HBD-2 溶液滴加在步驟3）固定有 HBD-2 抗體的玻片上，吹開(kāi)，于 37℃ 溫育 1 h，抗原抗體即可發(fā)生反應(yīng)；用緩沖液沖洗，再用超純水沖洗， N₂ 吹干備用；

5）液晶池的制作

液晶池由步驟2-1）得到的上玻片和步驟4）得到的下玻片組裝而成，玻片之間設(shè)有 Mylar 聚酯片， Mylar 聚酯片一邊設(shè)有開(kāi)口，上下玻片通過(guò)設(shè)置在沒(méi)有開(kāi)口的三邊邊緣的夾子固定；先將液晶 5CB加熱到 40℃ 左右使其呈各向同性的液態(tài)，然后將其從 Mylar 聚酯片的開(kāi)口處注入，液晶由于毛細(xì)管作用力而布滿整個(gè)空腔；自然冷卻到 28℃ 左右，用偏光顯微鏡觀察。

2.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高靈敏液晶型非標(biāo)記免疫傳感器檢測(cè) HBD-2 的方法，其特征在于：所述的步驟1）中酸處理玻片后用無(wú)水乙醇浸泡 10 min，使基底表面固定足夠的羥基。

3.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高靈敏液晶型非標(biāo)記免疫傳感器檢測(cè) HBD-2 的方法，其特征在于：所述的步驟2-1）中上玻片用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 0.2 % 的 DMOAP 水溶液浸泡30 min。

4.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高靈敏液晶型非標(biāo)記免疫傳感器檢測(cè) HBD-2 的方法，其特征在于：所述的步驟2-2）中下玻片用 APTES 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 3%-5% 且 DMOAP 質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 1% 的乙醇溶液中處理，使基底表面氨基化。

5.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高靈敏液晶型非標(biāo)記免疫傳感器檢測(cè) HBD-2 的方法，其特征在于：所述的步驟2-2）中下玻片于 80 ℃浸泡 2 h。

6.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高靈敏液晶型非標(biāo)記免疫傳感器檢測(cè) HBD-2 的方法，其特征在于：所述的步驟3）中將氨基化處理的下玻片用質(zhì)量分?jǐn)?shù)為 1%-3% 的戊二醛溶液于常溫下浸泡，使基底表面醛基化。

7.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高靈敏液晶型非標(biāo)記免疫傳感器檢測(cè) HBD-2 的方法，其特征在于：所述的步驟3）中將氨基化處理的下玻片浸泡在戊二醛中，在恒溫?fù)u床中反應(yīng) 1 h。

8.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高靈敏液晶型非標(biāo)記免疫傳感器檢測(cè) HBD-2 的方法，其特征在于：所述的步驟3）中將 80-120 nmol/L的 HBD-2 抗體溶液加在經(jīng)醛基化修飾的下玻片上，用洗耳球吹開(kāi)，于 37 ℃溫育 2 h，通過(guò)戊二醛的偶聯(lián)作用使基底表面固定 HBD-2 抗體。

9.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高靈敏液晶型非標(biāo)記免疫傳感器檢測(cè) HBD-2 的方法，其特征在于：所述的步驟4）中將將一定濃度的 HBD-2 溶液加在固定有 HBD-2 抗體的玻片上，洗耳球吹開(kāi)，于 37 ℃ 溫育 1 h，抗原抗體即可實(shí)現(xiàn)免疫反應(yīng)。

10.根據(jù)權(quán)利要求1所述的一種高靈敏液晶型非標(biāo)記免疫傳感器檢測(cè) HBD-2 的方法，其特征在于：所述的步驟5）中先將液晶 5CB 加熱到 40 ℃ 左右使其呈各向同性的液態(tài)，然后將其從中間開(kāi)凸型空腔的 Mylar 聚酯片開(kāi)孔處注入，液晶由于毛細(xì)管作用力而布滿整個(gè)空腔。