[發明專利]一種基于液晶生物傳感器檢測天蠶素B的方法

有效

• 申請號: 201711204561.3
• 申請日: 2017-11-27
• 公開（公告）號: CN107941712B
• 公開（公告）日: 2021-03-19
• 發明（設計）人: 蘇秀霞;徐佳;張婧;張姣;霍文靜;胡金龍;晏春苗;張海寧
• 申請（專利權）人: 陜西科技大學
• 主分類號: G01N21/21
• 分類號: G01N21/21;G01N33/531
• 代理公司: 西安西達專利代理有限責任公司 61202
• 代理人: 劉華

本發明提供了一種基于液晶生物傳感器檢測天蠶素B的方法，將N,N?二甲基?N?十八烷基(3?[三甲氧基硅烷]丙基)氯化銨/三乙氧基丁醛硅烷(DMOAP/TEA)混合自組裝修飾玻片表面，誘導液晶分子取向；采用TEA中的醛基將天蠶素B固定于自組裝膜修飾的基底表面，天蠶素B抗體與固定于玻片表面的天蠶素B特異性結合后，會擾亂液晶分子的取向，導致光學信號的顏色和亮度發生變化，以此實現對天蠶素B的檢測。本發明在檢測天蠶素B時，結合液晶生物傳感器的優點，從而具有靈敏度高、特異性好、非標記和操作簡單等特點。

技術領域

本發明涉及化學檢測技術領域，具體涉及一種基于液晶生物傳感器檢測天蠶素B的方法。

背景技術

天蠶素作為一種最早被發現并且被研究的動物抗菌肽，屬于陽離子抗菌肽。天蠶素B含有35個氨基酸殘基，不含半胱氨酸，結構中不含二硫鍵。其N端區域具有強堿性，而在C端區域可形成疏水螺旋，N末端區域富含親水堿性氨基酸殘基，這種結構有利于天蠶素吸附到帶負電荷的細胞膜上，C末端含較多的疏水性氨基酸殘基，疏水性的尾部有利于抗菌肽插入細胞膜的雙層脂質膜中，分子兩端各形成一個兩親性ɑ-螺旋，這種結構是破壞、裂解細菌的主要結構。天蠶素B對革蘭氏陽性菌、部分革蘭氏陰性菌均具有很強的殺傷力，而對真菌和真核細胞沒有毒，而在動植物抗病基因工程、植物育種、生物飼料添加劑等領域有著巨大的潛在應用價值。

然而，現有的檢測手段，現有多肽檢測方法有電位滴定法、高效液相色譜法、免疫分析法等，電位滴定法滴定終點難以判定，且受客觀環境影響大；高效液相色譜法的分析成本高，耗時長；免疫分析法對抗原抗體標記要求高。而本發明使用的方法具有靈敏度高、特異性好、非標記和操作簡單等優點。

發明內容

為了克服現有技術的的上述不足，本發明的目的是提供一種基于液晶生物傳感器檢測天蠶素B的方法。本發明為快速檢測天蠶素B（CB）存在提供了一種新的方法，具有靈敏度高、特異性好、非標記和操作簡單等優點。

為了達到上述目的，本發明采用的技術方案為：

一種基于液晶生物傳感器檢測天蠶素B的方法，將N,N-二甲基-N-十八烷基(3-[三甲氧基硅烷]丙基)氯化銨/三乙氧基丁醛硅烷(DMOAP/TEA)混合自組裝修飾玻片表面，誘導液晶分子取向；采用TEA中的醛基將天蠶素B固定于自組裝膜修飾的基底表面，天蠶素B抗體與固定于玻片表面的天蠶素B特異性結合后，會擾亂液晶分子的取向，導致光學信號的顏色和亮度發生變化，以此實現對天蠶素B的檢測。本發明包括以下步驟：

1)將玻片切割成2cm×2cm，用新配制的Piranha溶液[V(H₂SO₄):V(H₂O₂)=7:3]于80℃浸泡1h，再分別用乙醇和去離子水清洗干凈，經N₂吹干，于110℃干燥3h，防塵備用。

2)玻片的組裝

上玻片的DMOAP溶液組裝:將清洗烘烤后的玻片浸0.2%(體積分數)的DMOAP水溶液中，常溫下靜置30min，超純水沖洗干凈，N₂吹干，于110℃干燥，備用。

下玻片的TEA和DMOAP混合溶液組裝:將清洗烘烤后的玻片浸入(1%-5%)（體積分數）的TEA和1%（體積分數）DMOAP的10mmol/L醋酸-醋酸鈉（PH=5.0）溶液中，于50℃恒溫2h，超純水沖洗干凈，N₂吹干，于110℃干燥1h，備用。

3)天蠶素B的固定

取適量的CB溶液滴加至下玻片表面，于37℃溫浴2.5h，取出后分別用PBS緩沖液(PH=7.4)和超純水沖洗，除去未固定的CB分子，N₂吹干,置于-20℃下冷凍保存。

4)天蠶素B抗原抗體競爭免疫反應